2002 Fiscal Year Annual Research Report
ニジマス生殖幹細胞をベクターとして用いた新たな遺伝子導入技法の開発
Project/Area Number |
02J02417
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Research Institution | 東京水産大学 |
Principal Investigator |
竹内 裕 東京水産大学, 水産学部, 特別研究員(PD)
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Keywords | 始原生殖細胞 / 幹細胞 / 移植 / トランスジェニック / 遺伝子組換え / ニジマス / キメラ / 配偶子形成 |
Research Abstract |
始原生殖細胞(PGC)は、魚類胚内で唯一、卵や精子への分化能力をもつ生殖幹細胞である。in vitroへ単離したPGCに遺伝子導入を行った後、それらのPGCを卵・精子へと分化させることができれば、遺伝子改変魚を作出できる。本年度は、単離した直後のPGCをドナーとした移植を行い、宿主生殖腺内にドナー由来の配偶子を生産させ、次世代子孫中にドナー由来の個体を誕生させる技術の開発を目的とした。 緑色蛍光タンパク質遺伝子により可視化した黄色ニジマスのPGCを、野生型ニジマス艀化稚魚の腹腔内へと移植した。成熟した宿主魚から得られた精子を用いてPCR解析を行い、搾出精子内にドナー由来の精子が含まれているかを確認した。また、これらの精子を交配試験に供し、F1世代中にドナー由来の稚魚が誕生するかを観察した。さらに、ヤマメ胚を宿主として同様の実験を行い、異種間でのPGC移植およびドナー由来稚魚の作出を試みた。 成熟したニジマス宿主魚12個体中1個体が、ドナー由来の体色を示す黄色稚魚を産出した。全F1稚魚中に占めるドナー由来稚魚の割合は約4%であった。一方、ヤマメ宿主から得られた精子をニジマス卵に媒精した場合、37個体中1個体において、ニジマス稚魚の産出が確認された。また、このヤマメ宿主から産出されるニジマス稚魚の割合は0.4%であった。以上の結果、一度in vitroへ単離した細胞を、移植を介して個体へと変換する技術が完成した。さらに、PGC移植によるドナー由来精子の生産が異種間でも成立することが明らかとなった。
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Research Products
(9 results)
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[Publications] Yutaka Takeuchi, et al.: "Mass isolation of primordial germ cells from tranegenic rainbow trout carrying the green fluorescent protein gene driven by the vasa gene promoter"Biology of Reproduction. 67. 1087-1092 (2002)
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[Publications] Surintorn Boonanuntanasarn, et al.: "Gene knock-down in rainbow trout embryos using antisense morpholino phosphorodiamidate oligonucleotides"Marine Biotechnology. 4. 256-266 (2002)
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[Publications] Goro Yoshizaki, et al.: "Primordial germ cells : the blueprint for a piscine life"Fish Physiology and Biochemistry. (in press). (2003)
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[Publications] Goro Yoshizaki, et al.: "Visualization of primordial germ cells in transgenic rainbow trout carrying green fluorescent protein gene driven by vasa promoter"Fisheries Science. 68(Suppl.2). 1067-1070 (2002)
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[Publications] Goro Yoshizaki, et al.: "Mass isolation of primordial germ cells from transgenic rainbow trout carrying the GFP gene driven by the vasa gene promoter"Biology of Reproduction. 66(Suppl.1)(abstract 262). 203 (2003)
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[Publications] Yutaka Takeuchi, et al.: "A new method to produce germ-line chimeras using isolated GFP-labeled primordial germ cells in rainbow trout"Biology of Reproduction. 66(Suppl.1)(abstract 341). 236 (2003)
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[Publications] 吉崎 悟朗: "魚類における幹細胞を介した遺伝子導入技法開発の現状"海洋と生物. 139. 100-106 (2002)
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[Publications] 吉崎 悟朗: "魚類始原生殖細胞を利用した新たな育種技法の開発"BRAINテクノニュース. 92. 23-26 (2002)
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[Publications] Yutaka Takeuchi, et al.: "Visualization and isolation of live primordial germ cells aimed at cell-mediated gene transfer in rainbow trout. In : Shimizu N, Aoki T, Hirono I, Takashima F(eds.), Aquatic Genomics -Step toward a great future"Springer-Verlag Tokyo. 310-319 (2003)