2003 Fiscal Year Annual Research Report
Rho-キナーゼとCRMP-2による神経回路網形成機構の解明
Project/Area Number |
02J03418
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Research Institution | Nagoya University |
Principal Investigator |
中村 奈央 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 特別研究員(PD)
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Keywords | Rho / Rho-キナーゼ / CRMP-2 / ノックアウトマウス |
Research Abstract |
低分子量GTP結合蛋白質Rhoとそのエフェクター分子であるRho-キナーゼは神経細胞の移動、成長円錐の運動及び神経突起の伸展といった高次細胞現象を制御することが知られている。また、Rho-キナーゼの基質蛋白質のひとつであるCRMP-2は神経細胞の極性形成に重要な役割を果たしていることが示されている。 本研究においては、マウスをモデル動物として用いてRho/Rho-キナーゼ、およびCRMP-2の生理機能とその作用メカニズムの解明を目的としている。マウスにおいてRho-キナーゼのisoformはROCK1,ROCK2の2種類が報告されている。昨年度までにすでにROCK2のノックアウトマウスの作製は終了しており,ROCK2ノックアウトマウスが胎生14日前後で胎生致死であることを見出している。この時点では神経系の構築はほとんど起こっておらず、神経系構築におけるRho-キナーゼの解析を行うために、ドミナントネガティブ型Rho-キナーゼを神経特異的に発現するトランスジェニックマウスの作製・解析を行っている。 また、ROCK2ノックアウトマウスより初代培養細胞を単離し、細胞形態や細胞運動について解析を行った。野生型より単離した初代培養繊維芽細胞(ROCK1,ROCK2の2種類を発現)とROCK2ノックアウトマウスより単離した細胞(ROCK1のみ発現)の形態を比較したところ、アクチン細胞骨格に大きな変化は認められなかった。一方で、boyden chamber法により細胞の運動能を比較したところ、基質、及びシグナル依存的に運動能に差が見られる、という予備的な結果を得ている。今後引き続き、ROCK2の機能欠損による細胞運動に及ぼす影響を検討する予定である。
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