2003 Fiscal Year Annual Research Report
眼の形成における新規短鎖デヒドロゲナーゼ/リダクターゼの役割
Project/Area Number |
02J03991
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Research Institution | Okazaki National Research Institutes |
Principal Investigator |
鈴木 亮子 岡崎国立共同研究機構, 基礎生物学研究所, 特別研究員(PD)
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Keywords | レチノイン酸 / ビタミンA / short-chain dehydrogenase / reductase / ニワトリ胚 |
Research Abstract |
新規chick short-chain dehydrogenase/reductase (cSDR)は、一次構造および発生初期の眼における発現パターンから眼の形成に重要であるレチノイン酸の合成に関わる候補分子であると推測された。しかし、cSDRの酵素活性を高速液体クロマトグラフィーおよびレチノイン酸に応答性を示すレポーター細胞を用いて調べた結果、その可能性は低いことが判明した。そこで、cSDRの機能を明らかにするために1)網膜でのcSDRのタンパクの局在部位および細胞種の同定を行う、2)cSDRの発現を抑制し、その影響を調べる実験を行っている。1)に関してはcSDRに対する抗体を作製し、抗体の特異性を確認した。現在、免疫組織染色を行い、詳細にその局在を調べている。2)に関してはRNAiを用いたニワトリ胚の網膜に発現する遺伝子の発現抑制システムが当研究室で確立されたので、その系に基づいて数種類の発現抑制ベクターを構築した。培養細胞を用いて構築したコンストラクトがcSDRのmRNAを切断するか否かについて検討している。今後、1)からcSDRが網膜のどの細胞に局在するかが判明するので、そこからcSDRの機能を推察していくと同時に、2)のin vitroでRNAiによるcSDRの発現抑制が確認できれば、in vivoエレクトロポレーション法により発現抑制ベクターを網膜に導入し、その影響を網膜のマーカー分子を用いて調べていく。
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