2002 Fiscal Year Annual Research Report
RFPのエピジェネティックな転写制御機能の解析と発生・分化および発癌との関連
Project/Area Number |
02J05335
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Research Institution | Nagoya University |
Principal Investigator |
下野 洋平 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 特別研究員(PD)
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Keywords | RET finger protein / Mi-2 / Enhancer of Polycomb 1 / エピジェネティクス / BRG1 / 転写制御 / 精巣腫瘍 |
Research Abstract |
本研究の目的は、RFT finger protein(RFP)を含む核内蛋白複合体によるエピジェネティックな転写制御メカニズムが発生・分化および腫瘍形成に果たす役割を明らかにすることにある。本年度はRFPを介する転写抑制におけるMi-2の役割を解析した。Mi-2は高率に悪性腫瘍を合併する皮膚筋炎の自己抗原蛋白であり、エピジェネティックなメカニズムで転写抑制的に働くNuRD蛋白複合体の中心的構成蛋白となっている。酵母でのtwo-hybrid法による解析にて、RFPのCoiled-coil領域とMi-2のカルボキシル末端領域との結合が示された。さらに、免疫沈降法及び共焦点レーザー顕微鏡による観察にて、in vivoにおけるRFP、Mi-2及びヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)の共存が示された。また、ルシフェラーゼアッセイ法による転写活性の測定にてMi-2の各ドメインの解析を詳細に行い、アミノ末端領域での強い転写活性化能及びカルボキシル末端領域での転写抑制能を同定した。RFPの転写抑制能はMi-2の共発現にて用量依存的に増強した。これらの解析からRFPとMi-2が核内で蛋白複合体を形成し、協調して転写抑制メカニズムに働くことが示された。 Mi-2のアミノ末端領域の転写活性化機構を探るため、酵母のtwo-hybrid法によるスクリーニングを行い、結合蛋白としてBRG1を同定した。BRG1はエピジェネティックなメカニズムで主に転写活性化に働くSWI/SNF蛋白複合体の中心的構成蛋白である。酵母でのtwo-hybrid法による解析及び免疫沈降法による解析にて、BRG1とMi-2という二つのクロマチンリモデリング蛋白が相互に直接結合すること及びBRG1のブロモドメイン領域がMi-2のアミノ末端領域との結合に関わる事を示した。また、ルシフェラーゼアッセイ法による転写活性の測定にてBRG1がMi-2のアミノ末端領域の転写活性化能に関わっている事が示された。 RFPと核内で蛋白複合体を形成するEnhancer of Polycomb1(EPC1)の発現をマウスで検討し、精巣においてはRFPのO-グリコシル化修飾がEPCとの結合に重要であることを示した。さらに、ヒトの精巣腫瘍における検討にてRFPの発現がセミノーマ及びそのコンポーネントをもつ腫瘍に特異的に高いことを示した。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Tezel G et al.: "Differential expression of RET finger protein in testicular germ cell tumors"Pathology International. 52・10. 623-627 (2002)
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[Publications] Tezel G et al.: "Role for O-glycosylation of RFP in the interaction with enhancer of polycomb"Biochemical and Biophysical Research Communication. 290・1. 409-414 (2002)