2003 Fiscal Year Annual Research Report
乳腺:細胞増殖・分化と器官形成の制御機構の解明とタンパク質生産への応用
Project/Area Number |
02J05604
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Research Institution | Nagoya University |
Principal Investigator |
青山 康二 名古屋大学, 生命農学研究科, 特別研究員(DC1)
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Keywords | 乳腺上皮細胞 / 乳腺初代培養細胞 / 乳腺上皮組織幹細胞 / 細胞分化 / シグナル伝達 |
Research Abstract |
乳腺は、哺乳動物の性成熟過程に伴って発達し、妊娠、分娩を期に最終分化を遂げて形態・機能が変化する。この分化過程を制御するシグナル伝達機構について、多くの研究が培養細胞を用いて行われているが、生体内での詳細な分子機構には不明な点が多い。さらに遺伝子導入動物を用いた解析が必須となってきているが、要する時間、コスト、労力を考慮すると簡便な実験系とは言えない。本研究では、形質転換した培養乳腺上皮細胞を皮下に移植して乳腺を再構築させ、これをin vivoアッセイ系として用いて乳腺細胞の分化、増殖制御機構を解析し、乳腺の器官形成と機能分化の分子機構を解明することを目的とした。 本年度の研究においては、移植細胞の生着効率が高い移植方法の確立を目指した。具体的には、妊娠マウスより摘出した乳腺上皮組織由来の初代培養細胞にレトロウィルスベクターを用いて温度感受性SV40-largeT抗原を導入し、初代培養細胞株を樹立した。次にピューロマイシン耐性遺伝子と共にlacZ遺伝子を組み込んだレトロウィルスベクターを用いて、株化初代培養細胞を形質転換した後、ピューロマイシンで細胞を選択し、lacZ遺伝子を安定に発現する細胞株を樹立した。この形質転換細胞株を乳腺上皮組織由来の初代培養細胞と混合し、乳腺を切除した乳児マウスのfat pad中に移植してin vivoでの乳腺の再構築を試みた。移植部位を摘出し、X-gal染色による導入遺伝子の発現解析とカーミン染色によるホールマウント解析を行った結果、X-gal陽性細胞の存在が確認され、形質転換細胞が再構築された乳腺に存在することが確認された。現在は、形質転換乳腺をin vivoアッセイシステムとして確立するために、マーカー遺伝子の発現部位や乳管形成の状態を組織化学的手法により解析している。
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