2003 Fiscal Year Annual Research Report
植物病原糸状菌の感染初期における分子応答機構の解析
Project/Area Number |
02J05878
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Research Institution | Okayama University |
Principal Investigator |
辻 元人 岡山大学, 農学部, 特別研究員(PD)
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Keywords | 炭そ病菌 / 遺伝子タギング / アグロバクテリウム / 根頭がん腫病菌 / シロイヌナズナ / TAIL-PCR |
Research Abstract |
植物病原糸状菌の感染初期における分子応答機構の解明には、より多くの病原性変異株の獲得と解析が望ましい。これまでに、アグロバクテリウム形質転換(AtMT)法を用いてアブラナ科炭そ病菌形質転換体を迅速に取得できることを確認している。本年度はAtMT法によって作出した病原性変異株について遺伝子解析を進めるとともに、本法を利用した機能的遺伝子コンプリメンテーション、ターゲティング実験系の確立を試みた。 1.AtMT法により作出したアブラナ科野菜類炭そ病菌病原性変異株の遺伝子解析 AtMT法により作出した約1000株の形質転換体について宿主葉への接種試験を行い、8株の病原性変異株を得た。これらについてTAIL-PCRを行い、T-DNA挿入部位隣接配列のレスキューを行った。得られたレスキュー断片のシーケンス情報についてBLAST検索を行ったところ、3株について他菌既知遺伝子との相同性が認められた。 2.アブラナ科野菜類炭そ病菌病原性関連候補遺伝子の単離 類縁菌であるウリ類炭そ病菌において、MAPキナーゼ関連転写因子CST1が病原性に関与することを明らかにしている。保存配列をもとに設計したプライマーを用いてPCRを行うことにより、アブラナ科野菜類炭そ病菌においてCST1と相同性を持つ遺伝子を単離した。 3.AtMT法を利用した機能的遺伝子コンプリメンテーション、ターゲティング実験系の確立 T-DNA内部にCos部位を含むコスミドベクターを作成し、ゲノミックコスミドライブラリーを構築した。本ベクターを用いることにより、目的コスミドを単離後、AtMT法によりダイレクトに遺伝子コンプリメンテーション、ターゲティング実験が行えると考えた。実際に上述の病原性関連候補遺伝子を含むコスミドクローンを単離し、糸状菌形質転換を行うことによって、本実験系が有効に機能することを確認した。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] G.Tsuji, S.Fujii, N.Fujihara, C.Hirose, S.Tsuge, T.Shiraishi, Y.Kubo: "Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation for random insertional mutagenesis in Colletotrichum lagenarium."Journal of General Plant Pathology. 69・4. 230-239 (2003)
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[Publications] Hiroki Maruyama, Susumu Okamoto, Yasuyuki Kubo, Gento Tsuji, Isao Fujii, Yutaka Ebizuka, Keiko Furihata, Yoichi Hayakawa, Hiromichi Nagasawa, Shohei Sakuda: "Isolation of Abikoviromycin and Dihydroabikoviromycin as inhibitors of polyketide synthase involved in melanin biosynthesis by Colletotrichum lagenarium."The Journal of Antibiotics. 56・9. 801-804 (2003)
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[Publications] Gento Tsuji, Tomomi Sugawara, Isao Fujii, Yuuichirou Mori, Yutaka Ebizuka, Tomonori Shiraishi, Yasuyuki Kubo: "Evidence for involvement of two naphthol reductases in the first reduction step of melanin biosynthesis pathway of Colletotrichum lagenarium."Mycological Research. 107・7. 854-860 (2003)