2003 Fiscal Year Annual Research Report
RNAポリメラーゼIIの転写伸長反応を抑制するNELF複合体の機能解析
Project/Area Number |
02J06707
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Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
Principal Investigator |
成田 央 東京工業大学, 生命理工学研究科, 特別研究員(DC1)
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Keywords | 転写反応 / 転写伸長因子 / RNAポリメラーゼII / mRNAプロセシング / RNAi法 |
Research Abstract |
真核生物の転写反応は、遺伝子発現の制御の要として多くの研究者の注目を集めてきた。転写反応は開始・伸長・終結の三段階に分類できるが、近年になって転写反応の制御が、開始段階だけでなく伸長段階においても行われていることが分かってきた。 このような背景からこれまでに幾つかの転写伸長因子が同定されたが、それらは全て伸長反応を促進するものであった。我々が精製・同定に成功した転写伸長因子NELFは、伸長反応を負に制御する新しいカテゴリーの因子である。NELFの転写伸長反応における作用機序については詳細に解析されている一方で、NELFの細胞内での役割や転写伸長制御以外の機能といった点についてはよく分かっていない。そこで本研究では、NELFの細胞内での機能を解析することを目的とした。 NELFの細胞内機能を解明するため、(1)NEFFに相互作用する因子に注目する、(2)細胞内のNEFFの発現量を変化させる、という2つの方法を用いた。以下に各々の結果を示す。 (1)FLAGタグを付加したNELFを恒常的に発現するHeLa細胞株を樹立し、その細胞抽出液から免疫沈降法を用いてNELFに相互作用する因子を精製した。これらの因子について、質量分析計を用いてタンパク質を同定した。その結果NELFがRNAポリメラーゼIIといった転写装置に関係するもの以外に、mRNAプロセシングに関わる因子と相互作用することを明らかにした。これはNELFが転写伸長反応だけでなく、mRNAプロセシングにも関与する可能性を示唆している。現在、分子生物学的手法を用いてNELFとmRNAプロセシングとの関係を解析している。 (2)RNAi法を用いて、HeLa細胞内のNELFの発現を抑制することができた。現在、NELFの発現抑制による表現型や、遺伝子発現プロファイルの変化について解析を行っている。
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Research Products
(1 results)