2002 Fiscal Year Annual Research Report
マウス概日時計発振系における転写因子BMAL分子群の協調作用メカニズム
Project/Area Number |
02J08002
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Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
佐々木 桃子 東京大学, 大学院・理学系研究科, 特別研究員(DC2)
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Keywords | 概日時計 / サーカディアンリズム / 視交叉上核 / BMAL1 / BMAL2 / CLOCK / スプライスバリアント / 転写制御 |
Research Abstract |
交付申請書に記載した研究目的・実施計画に沿って研究を進め、下記の成果を得た。 mBMAL1はmCLOCKとともにマウスの概日リズム形成に必須な転写因子である。申請者が同定したmBMAL2はmBMAL1のホモログであるが、その機能は未知であり、また、概日時計の発振を担う転写調節メカニズムについても未だ不明な点が多い。そこでmBMAL1,mBMAL2,およびそれぞれのスプライスバリアントが協調的に遺伝子発現を制御する可能性を検証するために、BMAL1およびBMAL2を特異的に認識する群の抗体を作製した。まず、抗原部位を選定し、それぞれ抗原ペプチドを融合したGSTタンパク質をマウスおよびラットに免疫し、抗血清を得た。次に、抗原ペプチドを融合したMBPタンパク質を用い、これら抗血清の精製を行った。これらの抗体の特異性をELISAおよびウェスタンプロット解析を用いて確認した結果、抗原ペプチドを融合したタンパク質に対して特異的に反応する抗体をmBMAL1およびmBMAL2に対してそれぞれ1種類および3種類得た。そのうち1種類の抗mBMAL1抗体と2種類の抗mBMAL2抗体は培養細胞に強制的に発現させたBMAL分子に対して特異的に反応した。このようにして作製した抗体を用い、現在ウェスタンブロット解析によりマウス各組織および脳の領域におけるBMAL分子の発現様式を解析している。マウス脳においてmRNAの発現は確認できているものの、タンパク質の同定には至っていない。発現量が少ないか、あるいは発現領域が限局しているなどの原因が考えられるため、抽出法等の条件検討を行っている。また、培養細胞の強制発現系において共免疫沈降実験を行った結果、mBMAL2とmCLOCKが相互作用することが分かった。これらの解析結果は、BMAL分子群とCLOCKの協調的な相互作用を推定する上で、重要な知見であると考えられる。
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