2002 Fiscal Year Annual Research Report
レプトマイシンBを用いた核外移行蛋白質の同定とその機能に関する研究
Project/Area Number |
02J08543
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Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
鎌田 綾子 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 特別研究員(DC1)
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Keywords | レプトマイシンB / 核外移行 / Crm1 |
Research Abstract |
レプトマイシンB(LMB)は核外移行シグナル(NES)の受容体Crm1に特異的に共有結合し蛋白質核外移行を阻害する。今年度はLMBを用いた以前のスクリーニングから得られた新規核外移行蛋白質の解析の続きと、分裂酵母ORF-YFPライブラリーの構築、ライブラリーを用いた蛋白質の局在解析を行った。 1.新規核外移行蛋白質の機能解析 以前のスクリーニングで得られた新規核外移行蛋白質Nem1、Alp7のLMB添加後の局在変化より、これらが相互作用する微小管そのものがLMB添加により局在変化することを見出した。また微小管を構成するチューブリンを免疫染色法により解析したところ、チューブリンそのものが核細胞質問をシャトルしていることが明らかになった。さらにDNAや核膜の染色像から、LMB添加後、チューブリンが核内に蓄積し、それに続いて核内に紡錘体微小管様構造体が形成されることが明らかになった。この構造変化はM期の紡錘体微小管の構造変化に似ているが染色体の分配はおこらない。現在この構造変化の機構を解析中である。 2.分裂酵母ORF-YFPライブラリーの作成と蛍光蛋白質の局在解析 本研究室で構築された分裂酵母の全遺伝子ライブラリーを利用し、研究室内の多数の研究者と共同でORF-YFPライブラリーを作成、それらを分裂酵母に形質転換し、蛍光蛋白質の局在解析を行っている。ORF-YFPライブラリーは8割ほど完成しており、局在解析も3割ほど終了した。またLMBを用いて、新規核外移行蛋白質のスクリーニングも始めており、現在までに約20クローンを取得した。
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