2003 Fiscal Year Annual Research Report
転写因子としてのポリADPリボース合成酵素(PARP)の役割の解明
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02J10306
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Research Institution | Tohoku University |
Principal Investigator |
秋山 貴子 東北大学, 大学院・医学系研究科, 特別研究員(PD)
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Keywords | ポリADPリボース不合成酵素(PARP) / Reg / 転写 / DNA結合ドメイン / レコンビナント蛋白 / Gel Mobility Shift Assay / Southwestern法 / DNA affinity chromatography |
Research Abstract |
研究代表者は、インスリン産生細胞再生増殖因子であるRegの発現はReg遺伝子の転写誘導によること、またその転写誘導は、ポリADPリボース不合成酵素(PARP)が転写因子としてReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に特異的に結合し、その他複数の因子をリクルートし転写複合体を形成することで引き起こされることを明らかにした。そこで本研究では(1)PARPが転写因子として機能する際にPARP蛋白のどのドメインがReg遺伝子プロモーター領域に特異的に結合して機能しているのか、(2)Reg遺伝子上流域に形成されるPARPを含む転写複合体がどのような因子から成るのかを同定し、(3)PARPのこれらの因子との結合ドメインを明らかにすることで、転写因子としてのPARPによる遺伝子発現機構を解明する。 平成15年度の研究は以下のように進行した。 1.PARPがReg遺伝子プロモーター領域と特異的に結合する際に機能しているPARPのDNA結合ドメインを同定するため、平成14年度に確立した昆虫細胞PARP発現系でPARPとその変異体を発現させ、精製を行った。具体的には、野生型およびPARP内のzinc finger motif変異型PARPを、低張液による細胞溶解、硫安分画法およびDNA-cellulose chromatographyを用いて精製した。 2.得られたその変異体の比活性と収量は、野生型(558unit/mg,711μg)、HAタグ付野生型(570unit/mg,621μg)、zinc finger motif変異型(154unit/mg,190μg)であり、研究遂行に必要かつ充分なPARPとその変異体を得ることができた。 3.精製PARPの純度については銀染色法にて検討し、いずれも約90%以上の純度であることを確認した。 4.これらの精製蛋白質をもちいて、southwestern法、Electromobility Shift Assayにより、RegI promoter領域への配列特異的結合について精査を開始した。
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Research Products
(13 results)
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[Publications] Yutaka Yonemura: "Reg gene expression is associated with the infiltrating growth of gastric carcinoma"Cancer. 98. 1394-1400 (2003)
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[Publications] Hiroshi Okamoto: "The mechanism of β-cell regeneration by Reg protein : Experiments with Reg knockout mouse islets."Diabetes. 52(Suppl.1). A362 (2003)
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[Publications] Hiroshi Okamoto: "Beta-cell regeneration by Reg protein : experiments with Reg knockout and transgenic mice."Diabetologia. 46(Suppl.2). A29-A30 (2003)
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[Publications] 岡本 宏: "膵β細胞の死から再生へ:Reg-Reg受容体情報伝達系による再生医学"糖尿病. 46. S21 (2003)
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[Publications] 野口 直哉: "FK506結合蛋白質欠損マウスのグルコース刺激によるインスリン分泌の低下"糖尿病. 46. S193 (2003)
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[Publications] 高沢 伸: "Reg蛋白質-Reg受容体系の細胞増殖シグナル"生化学. 75・12. 1573 (2003)
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[Publications] Shin Takasawa: "Reg (Regenerating Gene) expression by poly(ADP-ribose)polymerase (PARP) and NFkappaB"生化学. 75・8. 688 (2003)
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[Publications] Shoko Kawaguchi: "Differentiation of mouse fetal hepatocytes into insulin-producing cells by nicotinamide"生化学. 75・8. 847 (2003)
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[Publications] 中川 圭: "Reg-Reg受容体系による膵β細胞の再生増殖とapoptosis:HGF遺伝子の活性化によるapoptosisの防止"Diabetes Frontier. 14. 108-109 (2003)
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[Publications] Hiroshi Okamoto: "Cyclin D1 activation through ATF-2 in Reg-induced pancreatic beta-cell regeneration"Diabetes. 53(In press). (2004)
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[Publications] 高沢 伸: "Reg蛋白質による細胞周期活性化機構"糖尿病. 47(印刷中). (2004)
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[Publications] 川口 晶子: "マウス胎児肝におけるインスリン遺伝子IとIIの発現"糖尿病. 47(印刷中). (2004)
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[Publications] 野口 直哉: "Cyclic ADP-riboseによる小胞体からのCa2+放出機構:FK506結合蛋白質の関与"Diabetes Frontier. 15(In press). (2004)