2002 Fiscal Year Annual Research Report
レンチウイルスベクターを用いたマキシザイムの導入による白血病遺伝子治療法の開発
Project/Area Number |
02J61420
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Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
白 元松 東京大学, 医科学研究所, 特別研究員(DC2)
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Keywords | マキシザイム / minor bcr-abl / Ph1ALL / シュードタイプレンチウィルスベクター / 遺伝子治療 / 遺伝子組み込み / アポトーシス / NOD-SCIDマウス |
Research Abstract |
本研究では、白血病の原因遺伝子を標的とするマキシザイムによる新たな遺伝子治療法の開発する事を目的としている。昨年度までに、水疱性口内炎ウイルス(VSV)シュードタイプレンチウイルスベクター[HIV(VSV)]が患者由来の白血病細胞を含むヒト血液細胞に対し、非常に優れた遺伝子導入効率および長期間安定した遺伝子発現を示すことを報告した。すなわち、レンチウイルスベクター[HIV(VSV)]の使用により患者由来の白血病細胞でほぼ100%の細胞に遺伝子導入が可能となり、また、造血幹細胞の増殖能、生存率、分化能および細胞表面抗原の発現にも影響を及ぼさないことが判った。一方、これまで頻用されてきたマウス白血病ウイルスベクターの改良も行ったが、VSVシュードタイプ化後も造血細胞への遺伝子導入効率は100%近くまで達したものの、染色体DNAへの組み込みはわずか5%にすぎなかった。従って、効率良い染色体DNAへの組み込み効率がHIV(VSV)ベクターによる導入遺伝子の長期安定発現の大きな要因と考えられた。我々は以前に、major bcr-ablを標的とした新たなマキシザイムが、慢性骨髄性白血病(CML)細胞を障害することを示しており、今年度は、minor bcr-abl遺伝子標的マキシザイムを用いたPh1陽性急性リンパ性白血病(Ph1ALL)に対する遺伝子治療法の開発を試みた。細胞へのマキシザイム導入には第三世代レンチウイルスベクターを用いた。全ての標的細胞でほぼ100%の遺伝子導入が認められ、マキシザイムの発現も確認された。Ph1ALL細胞株OM9;22、KOPN-30、72細胞で、マキシザイム導入後より生存率の低下が認められ、二週間後には約20%まで低下し、生細胞数の著減を認めた。また、これらの細胞では、アポトーシスの誘導およびbcr-abl mRNAの減少も認められた。一方、CML細胞株K562および正常臍帯血由来CD34陽性細胞(CBC)等では、細胞増殖および生存率の変化は認められず、CBCのコロニー形成能および分化能にも影響はみとめられなかった。今後、この方法で遺伝子導入した白血病細胞をNOD-SCIDマウス移植し、マウスモデルにおいてin vivoでの検討を行う予定である。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Yuansong Bai, et al.: "Effective transduction and stable transgene expression in human blood cells by a third-generation lentiviral vector"Gene Therapy. (in press). (2003)
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[Publications] Yuansong Bai, et al.: "Induction of Phl-positive acute lymphoblastic leukemia cell death with Maxizyme targeting minor bcr-abl fusion gene using the third-generation lentiviral vector system"Molecular Therapy. 5・5. S271-S271 (2002)
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[Publications] Yasushi Soda, et al.: "Influence to gene expression of human cord blood hematopoietic cells by gene transduction using a third-generation self-inactivating lentiviral vector"Molecular Therapy. 5・5. S313-S313 (2002)
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[Publications] Xiaojin Li, et al.: "Development of gene therapy targeting neutrophil disorders using gene-modified neutrophils"Molecular Therapy. 5・5. S33-S33 (2002)
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[Publications] Minghan Chen, et al.: "Isolation of canditate peptides which preferentially bind to hematologic malignancies from phage-display libraries"Blood. 100・11. 487b-487b (2002)
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[Publications] 曽田 泰: "新たな白血病治療法の開発:新規リボザイムであるマキシザイムの利用"臨床血液. 43・11. 973-981 (2002)