2002 Fiscal Year Annual Research Report
ホヤの間充織/筋肉の運命分岐に関わるmacho-1の転写調節機能の切り替えの機構
Project/Area Number |
02J61430
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
小林 健司 京都大学, 大学院・理学研究科, 特別研究員PD
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Keywords | カタユウレイボヤ / 発生運命の決定 / 卵割期 / 胚性の発現 / EST情報 / in situ hybridization / スクリーニング |
Research Abstract |
ホヤの発生過程における細胞系譜は詳細に記載されており、原腸陥入直前の110細胞期までに、ほとんど全ての割球の発生運命がオタマジャクシ幼生の単一の組織に限定される。また、これまでの知見から運命の限定と前後して、割球における発生運命の決定が起こっていることも分かっている。本研究で対象としている間充織/筋肉、脊索/神経索の運命分岐はこの時期に起こる。ホヤはモザイク卵として知られ、macho-1,β-catenin経路など母性の決定因子が発生運命の決定に重要な働きをしているが、決定因子の下流で働く遺伝子や(誘導などの)細胞間相互作用に関わるシグナル分子などは卵割期にその発現を開始する。 本研究では、カタユウレイボヤを用い、その豊富なEST情報を元に絞り込んだ候補遺伝子群に対して、whole-mount in situ hybridizationによるスクリーニングを行い、"母性には存在しなくて、卵割期に胚性の発現を開始する遺伝子"を網羅的に同定することを目的とする。今年度は、まず、カクユウレイボヤもしくは他種のホヤにおいて既に発現が記載されている遺伝子を用い、EST情報の有効性を評価した。その結果、EST数が比較的少ない(3〜4個以下)もの以外では発現パターンとEST情報に整合性が見られ、EST情報の有効性が確認できた。次に、cDNAプロジェクトで同定された20,462遺伝子クラスターに対し、EST情報を元に絞り込みを行い、724の候補遺伝子を得た。また、一度に多数のRNAプローブを調製する方法および機器を用いたin situ hybridizationのプロトコールの検討を行い、これらを確立した、現在は、候補遺伝子のスクリーニングを開始した所である。来年度は、スクリーニングを完了し、同定した遺伝子の機能解析、発現調節領域の比較によるシス因子の同定などを進めていく予定である。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Dehal, P., Satou, Y.et al.: "The draft genome of Ciona intestinalis : insights into chordate and vertebrate origins"Science. 298. 2157-2167 (2002)
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[Publications] Yamada, L.^*, Kobayashi, K.^*, Degnan, B., Satoh, N., Satou, Y.: "A genomewide survey of developmentally relevant genes in Ciona intestinalis:(IV) Genes for HMG transcriptional regulators, bZip and GATA/Gli/Zic/Snail"Development Genes and Evolution. 213(in press). (2003)
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[Publications] Wada, S.^*, Tokuoka, M.^*, Shoguchi, E., Kobayashi, K.et al.(^*:equally contribute): "A genomewide survey of developmentally relevant genes in Ciona intestinalis:(II) Genes for homeobox transcription factors"Development Genes and Evolution. 213(in press). (2003)