1991 Fiscal Year Annual Research Report
転写因子zif/268の神経細胞における遺伝子発現の調節機構とその産物の機能
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03454127
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
SAFFEN DAVID 東京大学, 医学部(医), 講師 (50231329)
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| Keywords | 転写因子 / 神経細胞 / 遺伝子発現 / ムスカリン性アセチルコリン受容体 / PC12細胞 / Cーキナ-ゼ / zinc finger |
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| Research Abstract |
(1)ラットのゲノムDNAライブラリ-を作製し、マウス由来zif/268のcDNAプロ-ブと特異的にハイブリダイズするクロ-ンを選別した。このゲノムDNA断片からzif268の5'領域(zif268遺伝子の転写制御領域)を単離して,それをpUMSVOCATのクロラムフェニコ-ルアセチルトラスフミドの調製は現在実施中である。(2)PC12細胞(ラット副腎髄質由来の褐色細胞腫)を用い、ムスカリン性アセチルコリン受容体の刺激やNGF(神経成長因子)受容体の刺激等によりzif/268のmRNAレベルが急激に増加することを確認した。前者の刺激によるzifの発現はPKC(Cーキナ-ゼ)を介して起こることや、後者の刺激による発現はPKCを必要としていないことを明らかにした。(3)zif268のC末端13個のペプチドで兎を免疫感作し、zif268転写因子と特異的に結合する抗体を調製した。この抗体を用いてラット脳やPC12細胞について免疫組織化学やwesternブロット分析を行いzif蛋白質の発現を調べた。(4)New England Biolabs社のpMALーcとpMALーp遺伝子発現ベクタ-を用いてmalE/zif268やmalE/zinc fingerドメイン融合遺伝子を作製し、これらを大腸菌で発現させた。これらの融合蛋白質が、zif268の認識するDNA配列(GCGGGGGCG)と結合することをSouthwestern法を用いて明らかにした。
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