1991 Fiscal Year Annual Research Report
副腎皮質刺激ホルモン放出因子受容体構造の解析と一次構造の決定
Project/Area Number |
03671146
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
深田 順一 京都大学, 医学部, 助手 (20189913)
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Keywords | 副腎皮質刺激ホルモン放出因子 / 受容体 |
Research Abstract |
副腎皮質刺激ホルモン放出因子corticotropin releasing hormone(CRH)は、視床下部ー脳下垂体ー副腎系以外に中枢神経系、自律神経系、消化管、胎盤等に広く分布し、生体が広範なストレスに適応するためのキ-ファクタ-と考えられている。本研究はこの広範な分布・作用に対応するべきCRH受容体の生化学的性状を明らかにすることを目標とする。そのためにはまず、標識体による細胞膜上受容体の至適検出条件を決定することがその後の研究に決定的に重要であるためCRH受容体陽性細胞の検出システムの確立を目指した。これまでの検討により、個相法によるCRH合成の過程で、受容体結合能に関与しないとされるN端セリン残基にのみビオチン分子を予め導入しHPLCで精製して得た1ーbiotinーCRH(CRH標識体)は、マウスACTH産生下垂体細胞株AtT20細胞よりのACTH分泌刺激能を指標にした検討により非標識CRHとほぼ同等の生物活性・受容体結合能を有することを確認した。この標識CRHをAtT20細胞と培養後、phycoeryhrinを結合したアビジンと反応させFACSー440を利用して標識、非標識細胞の分離を試みたが、これまでのところ陽性細胞を検出しうる条件を設定し得ていない。原因として標識物の特異活性(specific activity)が充分でないこと、あるいは蛍光検出装置の感度が充分でないこと等が考えられる。それぞれにつき、さらに検討を進めている。AtT20細胞のCRH受容体の絶対数が少なすぎることも検出できていない要因と考えられるため、本年度は遺伝子組替え技術を用いて人工的に受容体数を多量に発現させた細胞を用いることも検討している。
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