1991 Fiscal Year Annual Research Report
細胞核に存在する新しいイノシト-ルリン脂質特異的ホスホリパ-ゼCの構造と機能
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03808017
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
小泉 惠子 名古屋大学, 医学部, 講師 (00118027)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小島 清秀 名古屋大学, 医学部, 教授 (80073104)
吉田 松年 名古屋大学, 医学部, 助教授 (70090420)
伊豆田 俊二 名古屋大学, 医学部, 助手 (50203047)
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| Keywords | ホスホリパ-ゼC / イノシト-ルリン脂質 / 細胞核 / ホスファチジルイノシト-ルモノリン酸 / ホスファチジルイノシト-ル / 再生肝 |
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| Research Abstract |
我々により初めて細胞核に見い出されたイノシト-ルリン脂質特異的ホスホリパ-ゼC(PLC)の構造ならびに機能の解明を目的として実験を進め,以下の結果を得た。
1.細胞核PLCの精製:ラット腹水肝癌細胞(AH7974)より分離精製した核からPLCを可溶化し,4種類のカラムクロマトグラフィ-およびグリセロ-ル密度勾配超遠心を行って高度に精製された4種類のPLCを得た。4種とも既知のPLCr_1,r_2およびδのいづれの抗体とも反応せず,一時的にPLCーA,ーB,ーC,ーDと名づけた。成熟静止肝ならびに再生肝(S期)の核からもPLCを精製し,静止肝からはPLCーAとCが,再生肝からはAH7974細胞と同様PLCーA,ーB,ーCおよびーDが得られた。
2.細胞質上清および細胞膜PLCの精製:AH7974細胞より細胞質上清および細胞膜画分を調製し,それぞれからPLCを精製した。両画分とも主としてPLCーAおよびーCが同定された。
3.4種類のPLCの性質の比較:(1)すべてのPLCがその活性発現のためにCa^<2+>を要求した。また,すべてのPLCがホスファチジルイノシト-ルモノリン酸(PIP)ならびにジリン酸(PIP_2)の加水分解はμMオ-ダ-のCa^<2+>の存在下で効率よく行ったが,ホスファチジルイノシト-ル(PI)の加水分解には,PLCーA,ーB,ーCはmMオ-ダ-のCa^<2+>を要求し,一方,PLCーDのみμMオ-ダ-のCa^<2+>でPIを加水分解した。(2)PLCーAおよびーCはPIを最もよく加水分解し,一方,PLCーBおよびーDはPIPを最も効率よく加水分解した。(3)PLCーAおよびーCに比し,ーBおよびーDは効率よくDNAに結合した。
以上の結果から,PIPを最も効率よく加水分解し,DNAと結合するという特徴をもつPLCーBおよびーDは核に多く存在し,しかも増殖期細胞核に特異的なPLCであることが判明した。これらPLCの抗体の作製およびcDNAのクロ-ニングを目指して現在実験を進めている。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Hiroo Ishihara: "Growthーassociated changes in tatty acid compositions of muclear phospholipids of liver cells." Biochim.Biophys.Acta. 1084. 53-59 (1991)
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[Publications] Hiroshi Kuriki: "Existence of phosphoinositideーspecific phospholipase C in rat liver nuclei and its change during liver regeneration." J.Biochem.111. 283-286 (1992)
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[Publications] Masahiko Asano: "Purification and characterization of four forms of phosphoinositidesーspecific phospholipase c from nuclei of rat ascites hepatoma cells"
