2004 Fiscal Year Annual Research Report
レドックス調節による網膜光障害抑制機構の解析、及び臨床応用のための基礎研究
Project/Area Number |
03J04823
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
谷戸 正樹 京都大学, ウイルス研究所, 特別研究員(PD)
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Keywords | チオレドキシン / 網膜光障害 / 酸化ストレス / アポトーシス / 網膜色素上皮細胞 / スルフォラファン / ゲラニルゲラニルアセトン |
Research Abstract |
1,マウスを用いた網膜光障害実験 1)白色マウス(Balb/c、5週齢、オス)にスルフォラファンを1日量0.5mgで腹腔内投与した。投与3日目で、神経網膜および網膜色素上皮細胞層でチオレドキシンの誘導(ウエスタンブロット、免疫組織染色)が確認された。 2)白色マウス(Balb/c、5週齢、オス)に白色光を照射(6000ルクス、2時間)し、網膜光障害を惹起した。 3)スルフォラファンを1日量0.5mgで3日間腹腔内投与した上で、光照射を行った。 4)スルフォラファンを前投与したマウスでは、生理食塩水を投与したマウスと比べ、網膜障害(残存視細胞数、TUNEL陽性細胞率、網膜電図)が有為に抑制された。 2,培養細胞株を用いた実験 1)ヒト培養網膜色素上皮細胞株K-1034で、1マイクロMのスルフォラファン投与によりチオレドキシンの誘導が確認された(ウエスタンブロット)。 2)10マイクロMのスルフォラファン投与によっても、細胞障害(LDH放出アッセイ)、細胞内過酸化物生成(DCFH-DA/フローサイトメトリー)は認められなかった。 3)スルフォラファンによるチオレドキシン誘導には、チオレドキシンプロモーター内のARE領域へのNrf-2,small Maf-c-Junの結合が関与すると考えられた(ルシフェラーゼレポーターアッセイ、ゲルシフトアッセイ)。 4)ヒト培養網膜色素上皮細胞株株K-1034で、10マイクロMのゲラニルゲラニルアセトン投与により細胞内および細胞外のチオレドキシンの誘導が確認された(ウエスタンブロット、ELISA)。 5)マウス網膜視細胞株661Wへのチオレドキシン蛋白投与により、過酸化水素水による細胞障害が抑制された。
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Research Products
(2 results)