2003 Fiscal Year Annual Research Report
照射精子受精卵におけるS期チェックポイントにかかわるp53機能ドメインの解析
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03J05407
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
豊島 めぐみ 京都大学, 放射線生物研究センター, 特別研究員(DC2)
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Keywords | X線 / マウス受精卵 / S期チェックポイント / p53 |
Research Abstract |
当研究室では,照射精子受精卵を用いて発生初期における損傷応答を研究している.現在までに,初期胚では,これまで報告がなかったp53依存性S期チェックポイントを明らかにした.この発見はp53遺伝子の機能に関するこれまでの常識をくつがえすものである. 放射線応答シグナルとして,ATM, ATRが知られていて,p53の活性化にはこれらの分子によるリン酸化が必要である.初期胚でみられるS期チェックポイント機構にもATM, ATRが関与するかを検討した.方法として,ATM, ATRの活性阻害剤であるCaffeine,またATMの活性阻害剤であるWortmanninを用いてS期チェックポイントへの影響を調べた.非照射ではどちらの薬剤でも影響はみられなかった.しかし,X線照射によるDNA合成抑制はCaffeine, Wortmanninとも投与することにより解除された.これはp53依存性S期チェックポイントにATMが関与していることを示唆する. また,転写活性化領域に変異の入ったGST-p53タンパクをインジェクションしたところ,DNA合成抑制が見られた.転写阻害剤であるα-amanitinを投与してもDNA合成には影響がなかった。これらの結果は,S期チェックポイントにはp53が下流の遺伝子を活性化することによるのではないことを示唆している. しかし,配列特異的DNA結合領域に変異の入ったp53タンパクをインジェクションしたところ,照射精子受精卵において,DNA合成抑制はみられなくなった. 以上のことより,p53のDNA結合が転写とは異なる機構を介してS期チェックポイントに関与していることがいえるであろう.
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Research Products
(1 results)
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[Publications] Shimura T, Toyoshima M, Taga M, Shiraishi K, Uematsu N, Inoue M, Niwa O.: "The novel surveillance mechanism of the Trp53-dependent s-phase checkpoint ensures chromosome damage repair and preimplantation-stage development of mouse embryos fertilized with x-irradiated sperm."Radiation research. 158(6). 735-742 (2002)