2003 Fiscal Year Annual Research Report
ブタ成熟卵子の初期胚発生過程におけるS期誘導因子に関する分子生物学的研究
Project/Area Number |
03J08254
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Research Institution | Hiroshima University |
Principal Investigator |
伊藤 潤哉 広島大学, 大学院・生物圏科学研究科, 特別研究員(DC2)
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Keywords | PKC / カルシウム / ブタ / 卵子 / MPF / MAP kinase / 活性化 / 核移植 |
Research Abstract |
近年繁殖技術の進歩により,多くの哺乳動物において核移植による体細胞クローンの作出に成功している.しかし,現在最適な方法で核移植を行った場合でも,産子の獲得に成功する割合は著しく低い.この原因として特にブタにおいては,卵子の活性化処理法が十分に確立していないことがあげられる.本研究では,下等動物の受精時に活性化することが知られているプロテインキナーゼC(PKC)に着目し,ブタ卵子におけるPKCの役割を明らかにすることによって,PKCの活性化を考慮したブタ卵子の新規活性化処理法を確立することを目的とした.その結果,細胞内Ca^<2+>イオンを上昇させる処理であるCa^<2+>イオノフォア処理後,PKC抑制剤Calphostin C添加培地で培養した卵子において,Calphostin Cの濃度依存的にMAP kinase活性の低下と前核形成が抑制されたことから,Ca^<2+>イオノフォア処理による卵子の活性化にはPKCが関与していることが明らかとなった.また,PKC活性化剤PMAの添加濃度依存的にMAP kinase活性の低下が認められた.しかし,すべての濃度のPMA処理区において,p34^<cdc2> kinase活性の十分な低下は認められなかった.さらに,Ca^<2+>イオノフォア処理後,PMA添加培地で培養すると,卵子のp34^<cdc2>kinase活性,MAP kinase活性のいずれも十分に低下し,多くの卵子は前核を形成した.以上のことから,ブタ卵子の活性化時において,Ca^<2+>イオンの上昇を介したp34^<cdc2>kinase活性の低下とPKCの活性化を介したMAP kinase活性の低下により前核形成が誘起されることが明らかとなった.またCa^<2+>イオンの上昇およびPKCの活性化を利用した活性化処理であるCa^<2+>イオノフォアとPMAの複合処理は,ブタ卵子を効率よく活性化できる方法であると考えられた.
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Junya Ito: "Effect of Protein Kinase C Activator on Mitogen-Activated Protein Kinase and p34^<cdc2> Kinase Activity During Parthenogenetic Activation of Porcine Oocytes by Calcium Ionophore"Biology of Reproduction. 69. 1675-1682 (2003)
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[Publications] Masayuki Shimada: "PI 3-kinase in cumulus cells is responsible for both suppression of spontaneous maturation and induction of gonadotropin-stimulated maturation of porcine oocytes"Journal of Endocrinology. 179. 25-34 (2003)
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[Publications] Junya Ito: "Mitogen-Activated Protein Kinase Kinase Inhibitor Suppresses Cyclin B1 Synthesis and Reactivation of p34^<cdc2> Kinase, Which Improves Pronuclear Formation Rate in Matured Porcine Oocytes Activated by Ca^<2+> Ionophore"Biology of Reproduction. 70(In press). (2004)