2003 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
03J09844
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Research Institution | Hokkaido University |
Principal Investigator |
阿部 一啓 北海道大学, 大学院・理学研究科, 特別研究員(DC2)
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Keywords | H / K-ATPase / tetraprotomer / single-molecule detection / oligomer / phosphoenzyme / enzyme-bound ATP / tetramer / P-type ATPase |
Research Abstract |
全反射蛍光顕微鏡を用いて、FITCによって修飾したH/K-ATPaseの蛍光一分子観察を行いました。観察した標品のATP加水分解活性と、一分子観察によって見積もった標品中に含まれる多量体の存在比(これは高速液体ゲルクロマトグラフィーから見積もられた多量体の存在比と一致した)、H/K-ATPaseが四量体として機能していることを見出しました。得られた結果を2003年7月のFASEB Summer Research Conferenceにおいて口頭発表し、2003年12月に米国化学会のBiochemistry誌に投稿、掲載されました。また同じP型ATPaseファミリーに属するNa/K_ATPaseの一分子観察も行い、この結果は2003年4月のAnnals of the New York Academy of Scienceに掲載されました。 また、H/K-ATPaseの四量体構造とATPase活性についてより詳細な検討を行い、輸送基質であるK^+が四量体の会合状態を変化させていることを見出しました。この結果は2003年12月に生体エネルギー研究会第29回討論会において共同研究者によって口頭発表され、現在Biochemistry誌に投稿準備中です。 H/K-ATPaseは四量体の内、2つのサブユニットがリン酸化中間体(EP)を形成し、もう2つのサブユニットがATPを結合した状態(EATP)でATPを加水分解することを以前報告しました[Abe K et al.,(2002) Biochemistry,41,2438-2445]。この反応が生理的な条件である、K^+存在下で進行することを見出し、この結果は2003年4月のAnnals of the New York Academy of Scienceに掲載されました。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Shunji Kaya: "Oligomeric Structure of P-Type ATPases Observed by Single Molecule detection Technique"Annals of the New York Academy of Science. 986. 278-280 (2003)
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[Publications] Kazuhiro Abe: "K^+ Induced Simultaneous Liberation of Two Moles of P_i, One from One Mole of EP and the other from EATP, of Oligomeric H/K-ATPase from Pig Stomach"Annals of the New York Academy of Science. 986. 281-282 (2003)
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[Publications] Kazuhiro Abe: "The correlation between the activity and the oligomeric form of pig gastric H/K-ATPase"Biochemistry. 42. 15132-15138 (2003)