2003 Fiscal Year Annual Research Report
ファイトプラズマの病原性・宿主決定因子の免疫組織化学的解明
Project/Area Number |
03J11300
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Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
魏 薇 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 特別研究員(DC2)
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Keywords | ファイトプラズマ |
Research Abstract |
宿主植物におけるファイトプラズマの動態はこれまで知られていない。そこで、高感度検出法であるnested-PCRによりファイトプラズマの植物体内の移行を追跡し、リアルタイムPCRによりファイトプラズマの増殖速度を測定し、免疫組織化学的手法により、各組織におけるファイトプラズマの分布を観察した。これらの結果をもとにファイトプラズマの植物における動態を解析した。すなわち、16SrRNA遺伝子を増幅するnested-PCRにより、接種1日後には接種葉に加えて茎頂と主茎全体にOY-Wの移行が認められた。2日後には根と最上位葉に検出された。1週間後より順次新たな最上位葉が展開を始めたが、これらの葉では常にOY-Wが検出された。そして2週間後以降上位葉から下位葉に向けて順にOY-Wが移行し、3週間後にはすべての葉より検出された。以上から、OY-Wが植物体全体に展開するのは接種3週間後であることが明らかになった。また、翻訳伸長因子EF-Tuをコードするtuf遺伝子を増幅するリアルタイムPCRにより、接種葉においても根においても、接種後2〜4週間のあいだ、1週間あたり約6倍ずつOY-Wは増殖することが明らかになった。さらに、感染植物の茎と根について切片を作製し、抗SecA抗体を用いてファイトプラズマの所在を観察した結果、接種1週間後までは検出されず、2週間後に一部の篩部にシグナルが観察され、3週間後以降には篩部全体に観察された。以上から、OY-Wは接種後短時間のうちに接種葉から主茎まで移行し、接種1日後に茎頂を含む主茎全体に、2日後には最上位葉および根に、その後は最上位葉から下位葉へと篩管を通じて移行することが明らかになった。リアルタイムPCRによるファイトプラズマの定量的解析はこれが初めてである。また、ウェスタンブロット解析及び免疫組織化学的解析により、抗SecA抗体はAY,WX,EY,RYDの四つ異なる16S-groupに属する8種のファイトプラズマに反応することが明らかになり、ファイトプラズマに共通した抗体である可能性が示唆された。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Wei, W.et al.: "In planta dynamic analysis of onion yellows phytoplasma using localized inoculation by insect transmission"Phytopathology. 84. 244-250 (2004)
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[Publications] Jung, H-Y. et al.: "'Candidatus Phytoplasma oryzae', a novel phytoplasma taxon associated with rece yellow dwarf disease."International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 22. 209-215 (2003)
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[Publications] Sato, M. et al.: "Multidrug resistance plasmid of Enterobacter cloacae transfers to erwinia herbicola in the phylloplane of mulberry and weeds."Journal of General Plant Pathology. 69. 391-396 (2003)
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[Publications] Jung, H-Y. et al.: "'Candidatus Phytoplasma ziziphi', a novel phytoplasma taxon associated with jujube witches' broom disease."International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 53. 1037-1041 (2003)
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[Publications] Jung, H-Y. et al.: "First complete nucleotide seguence and heterologous gene organization of the two rRNA operons in the phytoplasma genome."DNA and Cell Biology. 22. 209-215 (2003)
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[Publications] Jiang, H. et al.: "Distribution patterns of mulberry dwarf-phytoplasma about reproductive organs, winter buds, and roots of mulberry trees."Journal of General Plant Pathology. (公表予定). (2004)