1992 Fiscal Year Annual Research Report
骨格筋細胞の分化におけるタンパク質ホスファターゼの機能
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04152011
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
田村 眞理 東北大学, 抗酸菌病研究所, 教授 (20124604)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小林 孝安 東北大学, 抗酸菌病研究所, 助手 (10221970)
近藤 尚武 東北大学, 医学部, 教授 (20004723)
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| Keywords | プロテインホスファターゼ / cDNAクローニング / タンパク質リン酸化 |
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| Research Abstract |
1.タイプ2C_βプロテインホスファターゼcDNAのクローニング。
今回我々は、タイプ2Cプロテインホスファターゼ(PP2C)の2つのサブタイプ(2C_αおよび2C_β)のうち、2C_βの全長をコードするマウスcDNAクローン(pTK-1)を単離した、pTK-1は390個のアミノ酸より成るタンパク質をコードしており、活性なタンパク質の大腸菌での発現にも成功した。またノーザン解折の結果、pTK-1とハイブリダイズする2種類のmPNA(3.5kbおよび3.0kb)がマウスの各種臓器に普通的に観察されたが、比較的、脳、心臓および骨格筋で発現量が多かった。またP19細胞がレチノイン酸処理によって神経細胞に分化する過程で、特に、3.5kbのmRNAの量の増加が観察された。骨格筋の分化過程における、これらのmRNAの量的変動の有無については現在検討中である。
2.タイプ2C_αプロテインホスファターゼのリン酸化。
酵母細胞をPP2C_αの発現ベクターでトランスフォームし、 ^<32>Piでインオンベートしたところ、発現されたPP2C_αのセリン残基のリン酸化が観察された。一方精製したPP2C_αをカゼインキナーゼIIでリン酸化させたところ、PP2C_α1モルあたり1.5モルのリン酸を取り込みが観察された。リン酸化アミノ酸はセリンであった。さらにリン酸化ペプチドマッピングにより、in vivoおよびin vivitroでのリン酸化部位は同一であることが強く示唆された。以上の結果から、PP2C_αは酵母細胞内でカゼインキナーゼIIによりリン酸化された可能性が示唆された。PP2C_αのリン酸化の生理的意味については現在検討中である。
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[Publications] Kohji Fukunaga: "Dephosphorylatin of autophosphorylated Ca/calnodulin-dependent protein kindse II by protein phosphatase 2C" J.Biol.Chem.268. 133-137 (1993)
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[Publications] Takayasu Kobayashi: "Expression of rat type 2ca protein phosphatase in Saccharomyces cerevisiae cells" Adv.Prat.Phosphatases.
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[Publications] Susumu Ohishi: "Enhanced exression of type 2C protein phosphatase gene durinh myogenic differentiotin of C3H10T1/2 cells" Biochem.Internatl.28. 345-351 (1992)
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[Publications] Kazuki Kitamura: "mRNA levels of catalytic subunits of protein phosphatases 1,2A and 2C in hepatocarcinogenesis" Jpn.J.Cancer Res.83. 66-71 (1992)
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[Publications] Toru Yamasaki: "Characterization of mucin in the hepatic bile of patients with intrahepatic pigment stones" J.Gastroenterol.Hepatol.7. 36-41 (1992)
