2004 Fiscal Year Annual Research Report
ウイルス吸着タンパク質と光触媒の複合化による水中病原ウイルス除去・不活化技術開発
Project/Area Number |
04J03030
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Research Institution | Tohoku University |
Principal Investigator |
佐野 大輔 東北大学, 大学院・工学研究科, 特別研究員(PD)
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Keywords | ウイルス吸着タンパク質(Virus-Binding Protein : VBP) / 活性汚泥 / アフィニティクロマトグラフィ / 病原ウイルス / VBPクローニング / アミノシラン / ポリリジンタグ / ELISA |
Research Abstract |
病原ウイルスに対する親和性の高いタンパク質(ウイルス吸着タンパク質:Virus-Binding Protein, VBP)を活性汚泥中から分離し,このVBPを用いた全く新しい水中病原ウイルス除去・不活化技術を開発することが本研究の目的である.本年度は,VBPの配向固定化を目的としたポリリジンタグVBP(LysTag-VBP)の創出及びVBPクローンを大量に得るためのVBP発現系のスケールアップを試み,以下に述べる成果を得た. まずVBPのC末端にポリリジンタグを導入したLysTag-VBPの合成を試みた.ポリリジンタグ導入用のプライマーを設計し,PCR反応によりLysTag-VBP遺伝子を創出した.このLysTag-VBP遺伝子を組み込んだプラスミドpRSETを大腸菌に導入して培養したところ,LysTag-VBPを効率的に合成することに成功した.上述の固定化手法を用いてガラスビーズ表面上にLysTag-VBPを固定化し,固定化されたLysTag-VBPを用いてPV1吸着実験を行ったところ,固定化Lystag-VBPとPV1型間の結合が親和性の高いものであることが確認された. VBP発現系スケールアップでは,まず1Lの大腸菌培養槽を用いることで,従来と同じ時間内で10倍量の菌体を得る事を可能にした.スケールアップ前と比べて菌体当たりのVBP発現量には差がないことをSDS-PAGEにより確認し,VBPの発現量も従来と比べて約10倍になっていることが明らかとなった.また,従来の10倍容量を有する自作ニッケルカラムを用いることで,VBP精製に関しても約10倍のスケールアップに成功した.さらに,VBP発現系スケールアップにおける最大のボトルネックであったバッファー交換について,透析に代わる手法としてゲルろ過を採用し,VBP発現系全体に渡ってのスケールアップを実現していく.
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Research Products
(6 results)