1993 Fiscal Year Annual Research Report
ヘテロサイクリックアミン誘発実験動物腫瘍における遺伝子変化
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05152150
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| Research Institution | National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East |
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Principal Investigator |
長尾 美奈子 国立がんセンター研究所, 発がん研究部, 部長 (40100151)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
若林 敬二 国立がんセンター研究所, 生化学部, 部長 (60158582)
牛島 俊和 国立がんセンター研究所, 発がん研究部, 研究員 (90232818)
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| Keywords | PhIP / APC / ヘテロサイクリックアミン / genomic instability |
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| Research Abstract |
PhIP誘発ラット大腸がんにおけるAPC遺伝子変異の関与を明らかにすることを目的とし、先ずラット正常APC cDNAの塩基配列を明らかにした。
F344雄ラット肝よりRNAを抽出し、ヒトAPCのヌクレオチド配列をプライマー配列に用いて、RT-PCRで増巾し、direct sequentingでcDNAの全塩基配列を決定した。ヒトと高い相同性を示し、1ケ所に6塩基対の挿入が、他の場所に3塩基対の欠失があった。コーディング領域は、ヒトより3塩基対短かい8526ヌクレオチドで、ヌクレオチドレベルで86.2%、アミノ酸レベルで90.2%の相同性があった。次に得られたラットのヌクレオチド配列に基づいてプライマーを作成し、PCR-SSCP解析によりPhIP誘発ラット大腸がんにおける変異の有無を検討した。
2例の腺がんで、コドン1413のGGG部位から1個のG塩基の欠失が検出された。さらにこれら変異のあった腺がんのうち1個にコドン869で同様にGGGから1個のG塩基の欠失が検出された。検出された突然変異がすべてGGGからGGへの変異であったことから、この変異をPhIPのmutational fingerprintとして用いることで出来る可能性がある。
次にPhIP誘発大腸がんにおけるgenomic instabilityの関与を、microsatellite probeを用いて検索した。15の異なる染色体に分布する43種類のmicrosatelliteに対するプライマーを用いて、腫瘍DNAをPCRで増巾し変性条件下で泳動した。8例中2例の腫瘍で1繰り返し単位の延長が、少なくとも2つのloci以上で検出された。この事はPhIP大腸発がんにgenomic instabilityが関与していることを示唆するものである。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Kakiuchi,H.,Nagao,M.et al: "Rare frequency of activation ofthe Ki-ras gene in rat colon tumors induced by heterocyclic amines: possible alternative mechanisms of human colon carcinogenesis" Molecular Carcinogenesis. 8. 44-48 (1993)
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[Publications] Nagao,M.and Sugimura,T.: "Carcinogenic factors in food with relevance to colon cancer development" Mutat.Res.290. 43-51 (1993)
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[Publications] Makino,H.,Nagao,M.et al.: "Absence of p53 mutations in ratcolon tumors induced by 2-amino-6-methyldipyrido-〔1,2-a:3',2'-d〕imidazole,2-amino-3-methylimidazo〔4,5-f〕quinoline,or 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo〔4,5-b〕pyridine" Jpn.J.Cancer Res.,. (in press).
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[Publications] Kitazawa,T,Nagao,M.et al.: "2-Hydroxyamino-1-methyl-6-phenylimidazo〔4,5-b〕pyridine(N-OH-PhIP)induces recombinational mutations in mammalian cell lines as detected by DNA fingerprincing" Mol.Carcinog.,. (in press).
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[Publications] Ushijima,T.,Nagao,M.et al.: "Infrequent mutation of Ha-ras and p53in rat mammary carcinomas induced by PhIP"
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[Publications] Ushijima,T.,Nagao,M.et al.: "Genetic alterations in HCA-induced tumors.in Proceedings of 23rd Princess Takamatsu Symposium" Princeton Scientific Publication Co.,Inc.,Princeton,NJ,in press,
