1993 Fiscal Year Annual Research Report
EGF様ドメインに発見された新しいオリゴ糖鎖の機能解析
Project/Area Number |
05274219
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Research Institution | Kyushu University |
Principal Investigator |
岩永 貞昭 九州大学, 理学部, 教授 (90029942)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
川畑 俊一郎 九州大学, 理学部, 助手 (90183037)
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Keywords | ヒトIX因子 / EGF類似ドメイン / O-結合型糖鎖 / IX因子由来活性化ペプチド / ガラクトサミン / VII因子 / 血友病B因子 / 糖鎖構造 |
Research Abstract |
我々は、血液凝固因子のFactor IX,Factor VII, Protein Zや血小板に存在する糖タンパク質のトロンボスポンジンのEGF類似ドメインに新規のO-結合型糖鎖(Xyl-Glc-O-Ser,Xyl-Xyl-Glc-O-Ser)を見出し、すでに報告した。その後、さらにヒトFactor IXの第一EGF類似ドメインのSer-61にFucを介したオリゴ糖が結合していることを見出し、それらの構造と機能について解析してきた。最近、ヒトFactor IXのAP(残基No.146-180に相当)のアミノ酸分析を行なったところ、GlcNH_2に加えてGalNH_2が定量され、O-結合型糖鎖の存在が示唆された。APは、Factor IXを組織因子存在下、VIIa因子で活性化し、逆相HPLCにより単離した。得られたAPをN-グリコシダーゼFで処理し、Asn-結合型糖鎖を除去後、エンドペプチターゼAsp-Nで断片化し、精製したペプチドについて2-アミノピリジンを用いた糖組成分析とシアル酸(SA)の定量を行った。その結果、1molのペプチド当たり、Ga1NAc,Gal,SA,それぞれ1molを含む2つのペプチド(AP157-165,AP166-176)が同定された。両ペプチドのアミノ酸配列分析を行なったところ、Thr-159 とThr-169 に相当するPTH-アミノ酸は全く回収されなかった。従って、これら2つのThr残基にGalNAc,Gal,SAから成るトリサッカライドが結合していると推定した。なお、ヒトFactor IXのAPは、逆相HPLCにより少なくとも3種類に分別されるが、その中で、O-結合型糖鎖を含まないAPも存在することが判明した。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Fuminori Tokunaga: "Limulus Hemocyte Transglutaminase: Its Purification and Characterization,and Identification of the Intracellular Substrates." J. Biol. Chem.268. 252-261 (1993)
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[Publications] Fuminori Tokunaga: "Limulus Hemocyte Transglutaminase: cDNA Cloning, Amino Acid Sequence,and Tissue Localization." J. Biol. Chem.268. 262-268 (1993)
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[Publications] Hitoshi Nishimura: "Factor IX Fukuoka: Substitution of Asn-92 by His in the Second Epidermal Growth Factor-like Domain Results in Defective Interaction with Factors VIII/X." J. Biol. Chem.268(32). 24041-24046 (1993)
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[Publications] Tatsushi Muta: "Horseshoe Crab Coagulation Factor B: A Unique Serine Protease Zymogen Activated by a Cleavage between I1e-I1e Bond." J. Biol. Chem.268. 21384-21388 (1993)
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[Publications] Shun-ichiro Kawabata: "Rabbit Liver Microsomal Endopeptidase with Substrate Specificity for processing proproteins is Structurally Related to Rat Tests Metalloendopeptidase 24.15." J. Biol. Chem.268(17). 12498-12503 (1993)
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[Publications] Nahoki Kuraya: "Structural Analysis of O-linked Sugar Chains in Human Blood Clotting Factor IX." J. Biol. Chem.114(6). 763-765 (1993)
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[Publications] 津田 博子: "血液凝固線溶反応とプロテアーゼ・インヒビター" 消化器病セミナー 52, 15 (1993)
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[Publications] 西村 仁: "糖鎖の多様な世界(木幡陽、箱守仙一郎、永井克孝 編)" 講談社サイエンティフィク, 16 (1993)