1993 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
05454113
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Research Institution | University of Miyazaki |
Principal Investigator |
小野寺 良次 宮崎大学, 農学部, 教授 (60040862)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
富田 純史 宮崎大学, 農学部, 助教授 (70113230)
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Keywords | ルーメンプロトゾア / cDNAライブラリー / ジアミノピメリン酸脱炭酸酵素 / Entodirium caudatum / RNA / mRNA / CysAジーン塩基配列 / E.caudatum 山羊 |
Research Abstract |
平成5年度は、ルーメンプロトゾア発見150年目でもあり、また、ルーメンプロトゾアの遺伝子解析に世界で初めて筆者らが本格的に着手した年でもあり、記念すべき年となった。さて、平成5年度の研究計画・方法に記した通りに研究を進めたが、アノトバイオート培養しているEntodinium caudatumのmRNA量が100ng/gプロトゾア程度ときわめて低いことが分かり、そのために、cDNAライブラリー作製に要するmRNA量(5mug)がなかなか得られず、研究が少し遅れ、まだcDNAが作製できていない。他方、牛及び山羊のルーメン内容物から集めた混合プロトゾアからは、平均でそれぞれ、300及び50mug/gプロトゾアにも及ぶ多量のmRNAが得られることが分かった。そこで、mRNAを十分に含む虫体が得られるように、計画を少し変更して、山羊のルーメンからプロトゾアを完全に除去した後、これに E.caudatum のみを接種し、現在、in vivo でこの種を増殖させている。現在10^6/ml近くまで虫体密度が上がっているので、間もなくこのプロトゾアを用いてmRNAの精製を行う予定である。そして、当初計画通りcDNAライブラリーが作製できると考えている。すなわち、E.coli の培養に要するクリーンベンチ、安全キャビネット及び恒温振盪培養機が平成5年度の本研究予算で購入できたので、実際にこれを使用して混合プロトゾアからcDNAライブラリーをすでに作製できたからである。平成5年度は、上記の他、すでに購入済みのDNAシンセサイザーを用いて予定通りバクテリアのlysAジーンの塩基配列のうちの共通性の高い領域のオリゴヌクレオチドの合成を試み、それらをうまく合成できることを確認した。このように平成5年度は必要な基礎技術を一通り確立した。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] 小野寺良次: "ルーメンプロトゾアの遺伝子解析への挑戦" ルーメン研究会報. 3. 23-26 (1992)
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[Publications] D.P.Morgavi: "In vitro metabolism of chitin and protein from ruminal fungi by ruminal protozoa." Animal Science and Technology(Japan). 64. 584-592 (1993)
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[Publications] K.Okuuchi: "In vitro metablism of tryptophan by rumen microorganisms:The interrelationship between mixed rumen protozoa and bacteria." Animal Science and Technology(Japan). 64. 1079-1086 (1993)
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[Publications] K.Okuuchi: "Effects of salinomycin on the production of tryptophan,skatole and their related compounds by rumen bacteria,protozoa and their mixture." Animal Science and Technology(Japan). 64. 1087-1093 (1993)
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[Publications] T.Nagasawa: "Chiral high-performance liquid chromatogaphic separation of the three stereoisomers of 2,6-diaminopimelic acid without derivatisation." Journal of chromatography. 653. 336-340 (1993)
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[Publications] 小野寺良次: "ルーメンプロトゾアのcDNAライブラリーの作製" ルーメン研究会報. 4. 11-18 (1993)
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[Publications] 小野寺良次: "家畜栄養学" 川島書店, 340 (1993)
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[Publications] 小野寺良次: "牛はどうやって草からミルクをつくるのか-ルーメンの秘密-" 新日本出版社, 164 (1990)