1994 Fiscal Year Annual Research Report
主要組織適合性クラスII抗原の発現調節に及ぼすポリADPR合成酵素の作用機序の解明
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05670148
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Research Institution | Kochi Medical School |
Principal Investigator |
谷口 武利 高知医科大学, 医学部, 助教授 (90127944)
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Keywords | MHC class II / gene regulation / ポリADP-リボース / 融合蛋白 / macrophage / B cell |
Research Abstract |
これまでにMHC class II遺伝子発現にポリADPR合成酵素が何らかの形で影響を及ぼしていることは明らかとなったが、本酵素のみが作用しているとは考えにくい。何故なら、B cell line A-20細胞及びRaji細胞にも本酵素は存在しており、調節遺伝子領域の構造がB cellではマクロファージと異なるとは考えにくい。そこで、細胞特異的trans-acting factorが存在し、本酵素とcomplexを形成し作用しているのではないかと考え以下の実験を行った。 (1)本酵素のautomodification domainとDNA binding domainの一部を含むfusion蛋白を調製し、B cell line,macrophage cell lineを^<35>Sでラベルし、その核抽出液とこのfusion蛋白を結合させcomplexとし、Ni-affinity resinで分離した。SDS-PAGEによる分析でB cell lineからは45kDaの蛋白が本酵素と特異的に結合することが判明した。更に露光時間を長くし、詳しく調べたところ35kDa蛋白とも結合している可能性があった。この結果は、二価cross-linkerを用いた実験でも再確認することが出来た。 (2)一方、human MHC class IIの1st intron中にあるDNase hypersensitive siteのDNA断片をprobeとして、class II分子を常に発現する細胞、誘導できる細胞及びclass IIを発現しない細胞でSouth-western blot分析を行ったところ、class II分子を発現又は誘導可能なcell lineにのみこのprobe DNAと結合する35kDa蛋白が検出された。そこで、この35kDa蛋白が本酵素と結合した35kDa蛋白と同一な物か否か検討している。更にこの蛋白をcDNA libraryより単離することを現在検討中である。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Qu,Zhiqiang et al.: "Enhancement of IFN_γ-induced MHC class II gene expression by expressing an antisense RNA of poly(ADP-ribose)synthetase." J.Biol.Chem.269. 5543-5547 (1994)
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[Publications] Tomoda,Takashi et al.: "Imbalance of the interleukin 2 system in children with IDDM." Diabetologia. 37. 476-482 (1994)
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[Publications] Matsuura,Yasushi et al.: "Class II-Restricted Presentation of An Immunoglobulin Heavy-Chain-Gene Product by A Gene-Transfected B-cell Line." Jpn.J.Med.Sci.Biol.47. 195-210 (1994)
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[Publications] Takeo Imai et al.: "Preparation of High-Molecular-Weight DNA:Application To Mycobacterial Cells." Anal.Biochem.222. 479-482 (1994)
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[Publications] Kenji Niiya et al.: "Different Regulation of Plasminogen Activator Inhibitor 2 Gene Expression by Phorbol Ester and cAMP in Human Myeloid Leukemia Cell Line PL-21." Thrombosis and Haemostasis. 72. 92-97 (1994)