2006 Fiscal Year Annual Research Report
EF-handカルシウム結合モチーフを持つタンパク質のX-線結晶構造解析
Project/Area Number |
05F05455
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Research Institution | Chiba University |
Principal Investigator |
中野 實 千葉大学, 理学部, 教授
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
IMAI Fabiana Lica 千葉大学, 理学部, 外国人特別研究員
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Keywords | 高次構造 / 結晶構造解析 / EF-hand モチーフ / S100タンパク質 |
Research Abstract |
EF-handモチーフは多くのタンパク質に存在するカルシウム結合ドメインであり、タンパク質の活性化及び他のタンパク質との相互作用に関わると考えられている。S100A13,S100A14,VILIP-1,CalumeninはEF-handモチーフを持ち、様々な機能に関わっている。本研究では、これらのタンパク質の機能を解明する為に、X線結晶構造解析法によりタンパク質の三次構造の決定をめざす。 クローニング、発現、精製を行ったS100A13タンパク質の結晶化条件を検討した。20℃、22%(w/v)PEG 3350、0.1M HEPES-NaOH pH 7.5、1,2,3-heptanetriolの条件下で0.25×0.05×0.05mmのタンパク質の結晶が析出し最適条件とした。最適条件で得た良質のS100A13タンパク質の結晶について、高エネルギー加速研究機構Spring-8にて分解能1.8AのX-線回折データを収集した。S100A13の結晶はP2_12_12_1の空間群に属し単位格子はa=39.7,b=59.2,c=77.6であった。S100A13の三次構造モデルは、X-線回折で計算された電子密度図を分子置換法にてS100A8/S100A9のヘテロダイマーをモデルとして構築した。高分解能のS100A13X-線結晶構造を解析しEF-handモチーフのカルシウム結合アミノ酸残基の特定及び二量体の構成に関与する水素結合と疎水性相互作用に関わるアミノ酸残基を特定した。S100A13タンパク質のX-線結晶構造解析についての論文は現在投稿中である。
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Research Products
(1 results)