2006 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
05F05688
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Research Institution | National Agriculture and Food Research Organization |
Principal Investigator |
矢部 希見子 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構, 食品総合研究所食品バイオテクノロジー研究領域生物機能制御ユニット, ユニット長
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
ALI Mohammad Babar 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構, 食品総合研究所食品バイオテクノロジー研究領域生物機能制御ユニット, 外国人特別研究員
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Keywords | アフラトキシン / 遺伝子破壊 / 破壊ベクター / 分子生物学的手法 |
Research Abstract |
アフラトキシンは特定のカビが生産する自然界で最も発ガン性の高い物質であり、また強力な急性毒性を有している。アフラトキシンによる穀物汚染は世界的に深刻な問題となっているが、未だアフラトキシン汚染の有効な防御法は得られておらず、汚染穀物のほとんどが廃棄されている。カビによるアフラトキシン生産は培養条件に依存的であり、その制御機構全体の解明により汚染防除策を創出できる可能性がある。そこで本研究は、効果的なアフラトキシン汚染の防御法を開発するための基礎的知見として、生産制御機構を生化学的及び分子生物学的な手法を用いて解析し、アフラトキシン生合成機構を解明することを目的としている。 平成18年度は、17年度に続いて、カビの遺伝子破壊を行った。アフラトキシン生産カビAspergillus parasiticusのゲノムに存在するアフラトキシン遺伝子クラスターに隣接し、機能が未知であるsugR遺伝子とort遺伝子についてアフラトキシン生産制御への関連性を明らかにするため、これらの遺伝子の破壊実験を行った。orf遺伝子プライマーを遺伝子情報に基づいて設計し、カビのDNAをテンプレートとしてPCR反応を行い、PCR産物と選択マーカーを連結して遺伝子破壊用断片を構築した。カビからプロトプラストを調製し、破壊ベクターを形質転換し、薬剤耐性を利用して形質転換殊を選抜した。得られた形質転換株からDNAを調製し、PCR法を利用して目的とする遺伝子破壊株の選択を試みた。その結果、sugR遺伝子破壊株とorb遺伝子破壊株が得られた。これらの破壊株は宿主であるアフラトキシン生産菌と比較して形態的に大きな変化は見られなかったが、アフラトキシン生産性にわずかな変化が見られた。19年度は、同領域に存在するsugR劇遺伝子とort遺伝子を含んだ4種の遺伝子についてRT-PCRを行い、発現の変化を詳細に調べる予定である。
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