2005 Fiscal Year Annual Research Report
センダイウイルスの持続感染機構の解析と遺伝子治療用ベクターへの応用
Project/Area Number |
05J00168
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Research Institution | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology |
Principal Investigator |
西村 健 独立行政法人産業技術総合研究所, ジーンファンクション研究センター, 特別研究員(PD)
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Keywords | 遺伝子治療 / センダイウイルス / cl.151株 / 持続感染 / 組換えウイルス |
Research Abstract |
本研究では細胞傷害性が極めて低く、かつ長期にわたって細胞質内で安定な遺伝子発現を維持できるセンダイウイルスcl.151株の性質に着目し、その持続感染機構の解析を通して、遺伝性代謝疾患等の遺伝子治療において有用な、細胞質内で長期間安定に存在できるRNA遺伝子発現系の開発を試みている。 まず、cl.151株を骨格としたセンダイウイルスベクターの発現持続性を調べるために、ファージにクローニングしたcl.151株の全長cDNAに、EGFP遺伝子やルシフェラーゼ遺伝子の発現カセットを挿入し、そのcDNAを基に組換えセンダイウイルスを作製した。EGFP発現cl.151株由来センダイウイルスベクターを培養細胞に感染させた結果、細胞障害性が極めて低く、6か月以上の長期にわたって安定な遺伝子発現が確認された。さらに、このベクターをラットの大腸に投与し、大腸上皮細胞におけるEGFP遺伝子の発現を観察した結果、2か月以上発現が持続していた。以上の結果より、cl.151株由来センダイウイルスベクターは生体内において持続的に遺伝子発現する遺伝子治療用ベクターとして非常に有用であることが示唆された。 また、ルシフェラーゼ発現cl.151株由来ベクターからの発現量、発現期間を、プラスミドからの発現と比較した結果、ともにcl.151株由来ベクターを用いた場合のほうが多かった。このことから、このベクターは培養細胞を用いた持続的タンパク質産生系としても有用であると考えられた。 さらに、細胞障害性のある名古屋株とcl.151株のcDNA断片から数種類のキメラcDNAを作製し、それを基に作製したキメラセンダイウイルスの細胞障害性を検討した。その結果、cl.151株の持続感染という性質には、M、F、L遺伝子上の複数の変異が必要であるということを明かにした。
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Research Products
(1 results)