2006 Fiscal Year Annual Research Report
4量体H/K-ATPaseの構造機能連関〜4量体構造の生理的意義の解明〜
Project/Area Number |
05J01307
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
阿部 一啓 京都大学, 大学院・理化学研究科, 特別研究員(PD)
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Keywords | H / K-ATPase / P-type ATPase / 二次元結晶 / 極低温電子顕微鏡 / Oligomeirc enzyme / 電子線結晶学 |
Research Abstract |
豚胃より大量生成したH/K-ATPase(プロトンポンプ)を対象として、二次元結晶を作製、立体構造の解明を目指している。以前報告したn-octyl glucoside可溶化標品による二次元結晶化の検討では、基質アナログAlFxADP存在下、非存在下において異なる今フォメーションの結晶が得られ、極低温電子顕微鏡により分解能約10Åの投影像を得ることが出来た。(a=127.23Å,b=112.11Å,γ=90^0,p22_12_1symmetry) 。更なる分解能の向上を検討した結果、decyl maltosideを用い、以前より酵素活性の安定な可溶化条件を見出し、AlFxATP存在下においてより分解能の高い(〜8Å)結晶を得ることが出来た(a=133.00Å,b=110.00Å,γ=90^0,p22_12_1symmetry)。また異なる種類の基質アナログ(BeF)や阻害剤(SCH28080)の添加によって得られた二次元結晶は、AlFxADP存在下の結晶とは異なる結晶系を示すことから、それぞれの二次元結晶が異なる反応中間体の構造を模倣していることが示唆される。プロトンポンプの行うATP加水分解と共役したイオン輸送は、大きな構造変化を伴うとされている。異なる反応中間体での構造が得られたことは、構造変化仮説を強く裏付ける証拠であると同時にポンプ作動のメカニズムを理解する為に非常に重要である。今後それぞれの反応中間体の立体構造の解明が急がれる。
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Research Products
(1 results)