2005 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
05J02344
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
松村 寛行 京都大学, 大学院・医学研究科, 特別研究員(DC1)
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Keywords | ES細胞 / 細胞融合 / リプログラミング / 染色体工学 / 再生医療 |
Research Abstract |
胚性幹(ES;Embryonic Stem)細胞は初期胚由来の幹細胞で、分化能や増殖能に優れているが由来する分化細胞は移植により拒絶反応を引き起こす。我々はES細胞が体細胞を未分化細胞に変化させる再プログラム化能を持つことを細胞融合実験から発見した。この再プログラム化能を応用して、融合細胞からES細胞由来の染色体を選択的に除去し個人対応型多能性幹細胞の作製を目指している。 これまで常染色体を丸ごと除去した報告はなく、独自に染色体除去カセット(CEC)を構築した。CECは薬剤耐性遺伝子と蛍光マーカー遺伝子を含んでいる。CECをランダムに導入したクローン(Puro耐性/GFP陽性)を任意に選別し解析したところ、11番(CEC11tg/+)と12番(CEC12tg/+)染色体への導入を確認した。これらのESクローンを胸腺細胞と細胞融合し、CECを活性化しFACSソーティングによりGFP陰性細胞を分取したところ、融合細胞核から11番または12番染色体が選択的に除去されている事を核型や染色体ペインティング解析から明らかにした。この様に、CECで印された染色体を核から選択的に除去する技術開発に成功した。次に、CEC(Neo/GFP)を相同組換えにより6番染色体に導入後、G418のHigh dose処理によりES細胞の2本の6番染色体にCECが導入されたクローンを選別した(CEC6tg/tg)。JF1マウス胸腺細胞との融合細胞でCECを活性化し、ES細胞由来の1対の6番染色体を除去した融合細胞を作製した。6番染色体上には未分化維持因子Nanogが同定されており、体細胞由来Nanogが未分化維持に働くことを明らかにした。(投稿中)
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