2005 Fiscal Year Annual Research Report
B細胞の変異能力を応用するタンパク分子進化システムの構築
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05J03571
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Research Institution | Okayama University |
Principal Investigator |
藤堂 景史 岡山大学, 大学院・自然科学研究科, 特別研究員(DC2)
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Keywords | DT40 cell / monoclonal antibody / molecular evolution / gene conversion / gene shuffling / activation-induced deaminase |
Research Abstract |
ニワトリB細胞株DT40の抗体遺伝子座に自発的に誘導されるDNA組換えを利用して、抗体タンパク、または異種のタンパク分子の機能改変を行い、機能的タンパクを創製できるようなシステムを構築する試みを行っている。本年度は以下の2点について検討を行った。 1、DT40は自発的にDNA組換えを引き起こすため、このDNA組換えメカニズムを人為的に制御し、ON/OFF制御する試みを行った。DT40の抗体遺伝子へのDNA組換えはactivation-induced deaminase (AID)分子依存的に引き起こされる。そこで、このAID分子の発現をCre-ER/loxPシステムによるDNAの物理的反転を利用する事により、AID遺伝子の発現を制御し、抗体遺伝子へのDNA組換えのON/OFFを厳密に制御できるDT40-SW細胞を樹立した。 2、抗体遺伝子へのDNA組換え機構が内因性の抗体のみでなく、外因性の任意のタンパク遺伝子においても誘導できるかどうか、またこの機構を利用し任意のタンパク分子の機能改変が可能であるかどうかを、蛍光タンパクを用いたモデルシステムを構築する事によって検討した。緑色蛍光タンパク(GFP)と青色蛍光タンパク(BFP)は2アミノ酸のみ異なる非常に相同な分子である。そこでDT40細胞内で、この2種類の蛍光タンパク間でのDNA組換えを誘導し、遺伝子シャフリングの結果、発する蛍光色が改変できるどうかを検討した。その結果、DT40の抗体遺伝子組換え機構により、BFP遺伝子がGFPの遺伝子と部分的に遺伝子置換され、発する蛍光色が青色から緑色に機能改変された。以上の事より、DT40の抗体遺伝子組換え機構は内因性の抗体以外の遺伝子においても誘導できる事が確認され、この機構を利用して任意のタンパク分子の機能改変を行う事ができる事が示唆された。
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Research Products
(1 results)