1995 Fiscal Year Annual Research Report
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06276105
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research |
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Principal Investigator |
稲垣 冬彦 財団法人東京都臨床医学総合研究所, 生理活性物質研究部門, 研究員 (70011757)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大野 茂男 横浜市立大学, 医学部, 教授 (10142027)
今川 正良 大阪大学, 薬学部, 助教授 (20136823)
山本 雅 東京大学, 医科学研究所, 教授 (40134621)
竹縄 忠臣 東京大学, 医科学研究所, 教授 (40101315)
片平 正人 横浜国立大学, 工学部, 講師 (70211844)
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| Keywords | Grb2 / SH2 / SH3 / リン酸化チロシン / プロリンに富むペプチド / NMR / 溶液構造 |
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| Research Abstract |
Grb2はSH3-SH2-SH3のモジュール構造を取り、EGFレセプターとRasとのシグナル伝達を仲介するアダプター型の蛋白質である。SH2を通してEGFレセプターのC端テ-ルのリン酸化チロシンに結合し、SH3を通してGDP-GTP交換活性を有するSosのC末端部のプロリンに富んだ部分と結合している。我々はGrb2とEGFレセプターのリン酸化チロシンを含むペプチドおよび、Sosのプロリンに富む配列との相互作用を明らかにし、認識の機構を解明することを目的として研究を行った。相互作用部位を解明するため、ラベル蛋白質とラベルしていないペプチドを用い、NMRフィルター法により13Cと12Cに結合した1H間の相互作用を検出した。ここで得られる情報に基づき複合体の立体構造を求めた。プロリンに富むペプチドに含まれるバリン残基は特異的な相互作用をしていることが明らかとなった。SH3はプロリンに富むペプチドと双方向結合するが、結合の方向は、ペプチド上の塩基性残基と非プロリン残基の位置により決定されることがわかった。この様にして、SH3はプロリンに富むペプチドのバラエティを増している。SH2とEGFレセプター及びShcのリン酸化チロシンを含むペプチドとの相互作用を解明した。Grb2はsrcファミリーのSH2と異なり、リン酸化チロシンより2番目のアスパラギンが特異性を決定している。構造解析の結果、src型SH2と異なるループがこのアスパラギンと強く相互作用を行う事が明らかになった。さらにこのループ上の残基に変異を加えることにより、結合が弱くなることを確認した。従来とは異なる認識をしていることが結論出来た。SH3は細胞骨格の蛋白質と相互作用する。リン酸化によりアクチン結合能が制御されているデストリンの構造を三重共鳴三次元NMR法により決定した。分子量20Kと大きなため、三重共鳴三次元NMRを主に用い、立体構造を決定した。この結果、デストリンはゲルゾリンファミリーと良く似た構造を取ることが明らかとなった。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Ichikawa, S.: "Solution Structure of Cysteine-Rich Domain of Protein Kinase Cx." Journal of Biochemistry. 117. 566-574 (1995)
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[Publications] Kohda, D.: "Trajectory analysis of NMR structure calculations." Journal of Biomolecular NMR. 5. 357-361 (1995)
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[Publications] Nagata, K.: "Three-dimensional Solution Structure of Bombyxin-II an Insulin-like Peptide of the Silkmoth Bombyx mori : Structural Comparison with Insulin and Relaxin." J. Molecular Biology. 253. 749-758 (1995)
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[Publications] Nagata, K.: "Identification of the Receptor-recognition Surface of Bombyxin-II, an Insulin-like Peptide of the Silkmeth Bombxy mori : Critical Importance of the B-chain Centnal Part." J. Molecular Biology. 253. 759-770 (1995)
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[Publications] Hashimoto, R.: "N-terminal Deletion Mutants of Insulin-like Growth Factor-II (IGF-II) Show Thr^7 and Leu^8 Important for Binding to Insulin and IGF-I Receptors and Leu^8 Critical for All IGF-II Functions." The Journal of Biological Chemistry. 270. 18013-18018 (1995)
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[Publications] Ogra, K.: "^<13>C Fully Refocused Multi-dimensional ^<13>CEdited Pulse Sohemes Using Broadband Shaped Inversion and Refocusing Pulses." Journal of Magnetic Resonance. (in press).
