1995 Fiscal Year Annual Research Report

ヒトプリオン蛋白遺伝子による遺伝子置換マウスモデルの確立

Research Project

Project/Area Number	06404032
Research Institution	Kyushu University
Principal Investigator	立石潤九州大学, 医学部, 教授 (70033305)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中村健司九州大学, 生医研, 助手 (90253533) 北本哲之東北大学, 医学部, 教授 (20192560)
Keywords	クロイツフェルト・ヤコブ病 / プリオン蛋白 / 遺伝子置換
Research Abstract	クロイツフェルト・ヤコブ病(以下CJDと略す)の病原因子としてプリオン仮説が提唱されている。プリオン蛋白遺伝子は、マウスとヒトでかなりhomologyが高いが、アミノ酸配列の少しの違いが感染性に強くかかわることは、我々の点変異を有するCJD患者の感染実験で明らかとなった。またヒトからマウスへの種間のバリヤ-を構成する1つの因子としてヒトとマウスのアミノ酸配列が考えられている。そこで我々はマウスのプリオン遺伝子をヒトのそれに置換することを本研究の目的とした。まず129SVマウスよりプリオン蛋白遺伝子をクローニングし、exon 3のopen reading frame(ORF)をヒト型におきかえ、exon 3の3′untranslate siteにloxpでかこんだneo遺伝子とgpt遺伝子を挿入し、negative selectionとしてDTA遺伝子をコンストラクトの3′側に加えた。ES細胞にこのコンストラクトを導入し、G418耐性の120クローン中1クローンでサザンブロットによりhomologous recombinationを確認した。このクローンから、キメラマウスを作製し、germ-line化したAgouti色のマウスのtailDNAの解析により50%の確立で導入したneo遺伝子の存在を確認した。現在はヘテロのマウスよりホモ化をはかっている。さらに加えて、導入したベクターの特徴としてloxpでneo遺伝子、gpt遺伝子をかこんでいるため、Cre recombinaseにてloxp間の遺伝子を欠失させることができる。このrecombinationをヘテロのマウスの受精卵にCreを導入し行ったところ、7匹のマウス中6匹でCreによるloxp間の欠失を確認した、この6匹はすでにヒト型プリオン蛋白遺伝子に完全に置換されており世界で初めて一回のhomologous recombinationにより遺伝子置換を導入することに成功した。来年度はさらに変異型プリオン蛋白の導入を試みる予定である。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Tateishi, J.: "Inherited prion disease and transmission to rodents." Brain Pathol.5. 53-59 (1995)
[Publications] Nakagawa, Y.: "Allelic variation of apolipoprotein E in Japanese sporadic Creutzfeldt-Jakob disease patients." Neurosic. Lett.187. 209-211 (1995)
[Publications] Yamada, T.: "Apolipoprotein E mRNA in the brains of patients with Alzheimer′s disease." J. Neurol. Sci.129. 56-61 (1995)
[Publications] Nakagawa, Y.: "Apolipoprotein E in Creutzfeldt-Jakob disease." Lancet. 345. 68- (1995)
[Publications] Tateishi, J.: "First experimental transmission of fatal familial insomnia." Nature. 376. 434-435 (1995)
[Publications] Furukawa, H.: "New variant prion protein in a Japanese family with Gerstmann-Straussler syndrome." Mol. Brain Res.30. 385-388 (1995)
[Publications] Tateishi, J.: "Prion diseases." Microbiol. Immunol.39. 923-928 (1995)
[Publications] Oda, T.: "Prion disease with 144 base pair insertion in a Japanese family line." Acta Neuropathol.90. 80-86 (1995)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

ヒトプリオン蛋白遺伝子による遺伝子置換マウスモデルの確立

Principal Investigator

立石 潤 九州大学, 医学部, 教授 (70033305)

Research Products

[Publications] Tateishi, J.: "Inherited prion disease and transmission to rodents." Brain Pathol.5. 53-59 (1995)

[Publications] Nakagawa, Y.: "Allelic variation of apolipoprotein E in Japanese sporadic Creutzfeldt-Jakob disease patients." Neurosic. Lett.187. 209-211 (1995)

[Publications] Yamada, T.: "Apolipoprotein E mRNA in the brains of patients with Alzheimer′s disease." J. Neurol. Sci.129. 56-61 (1995)

[Publications] Nakagawa, Y.: "Apolipoprotein E in Creutzfeldt-Jakob disease." Lancet. 345. 68- (1995)

[Publications] Tateishi, J.: "First experimental transmission of fatal familial insomnia." Nature. 376. 434-435 (1995)

[Publications] Furukawa, H.: "New variant prion protein in a Japanese family with Gerstmann-Straussler syndrome." Mol. Brain Res.30. 385-388 (1995)

[Publications] Tateishi, J.: "Prion diseases." Microbiol. Immunol.39. 923-928 (1995)

[Publications] Oda, T.: "Prion disease with 144 base pair insertion in a Japanese family line." Acta Neuropathol.90. 80-86 (1995)

立石潤九州大学, 医学部, 教授 (70033305)