1996 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト唾液腺癌細胞における新規な薬物受容体の検出と分化・アポトーシス誘導機構

Research Project

Project/Area Number	06404072
Research Institution	The University of Tokushima
Principal Investigator	佐藤光信徳島大学, 歯学部, 教授 (00028763)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	東雅之徳島大学, 歯学部附属病院, 講師 (20144983) 由良義明徳島大学, 歯学部附属病院, 講師 (00136277) 吉田秀夫徳島大学, 歯学部, 助教授 (30116131)
Keywords	ヒト唾液腺癌細胞 / 薬物受容体 / FdUMP / 細胞分化 / アポトーシス / サイトケラチン / プロテオソーム / プレクチン
Research Abstract	1.CNBr-activated Sepharose 4Bに5-fluorodeoxyuridine monophosphate(FdUMP)をカップリングさせ、FdUMPアフィニティカラムを作製し、HSG細胞より調製したタンパク抽出液を結合させ、溶出緩衝液で結合タンパクを溶出し、分子量約28kDaのタンパクを得た。このタンパクのアミノ酸シークエンスの分析の結果、NLDLDXIXXXVKAという9残基のアミノ酸が特定された。アミノ酸残基のホモロジーサーチにより、type II keratinであるCK5,CK6,CK8の配列であるNLDLDSIIAEVKAと解読できこのアミノ酸残基は100%一致し、未解読の部分もその配列は完全に一致した。以上の所見は、FdUMPはサイトケラチンと直接結合するか、または中間径フィラメントに結合しているアダプター分子と結合することを示唆している。 2.HSG細胞よりRNAを抽出して精製したmRNAを用いて、oligo dTプライマとrandomプライマを用いて逆転写を行いcDNAを調製して、λZAP Expressファージベクターにプロモーターに対してアンチセンス方向に挿入し、anti-sense oriented cDNA libraryを構築した。この発現ライブラリーをHSG細胞にトランスフェクションして、FdUMP存在下でも増殖可能な8個の細胞クローンを分離した。このクローンよりcDNA断片を回収し、塩基配列を決定した。その結果、プロテオソームを構成する酵素の遺伝子とプレクチン遺伝子を検出した。プレクチンは、中間径フィラメント、MAP1と2、細胞膜骨格タンパク、ラミンBと結合し、細胞膜と核膜をつなぐアダプター分子であると考えられている。以上の結果より、FdUMP結合タンパクとして精製されたII型ケラチンは、プレクチンを介してFdUMPと結合し、FdUMPのHSG細胞の増殖抑制と分化あるいはアポトーシス誘導に関連したシグナルを伝達しているものと考えられる。更にその下流にプロテオソームによるある種の蛋白分会酵素がFdUMPの細胞増殖抑制シグナルにおいて重要な役割を担っているものと思われる。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Mitsunobu Sato: "Induction of cyclin-dependent kinase inhibitor,p21^<WAF1> by treatment with 3,4-dihydro-6-[4-(3,4-dimethoxybenzoyl)-1-piperazir2(1H)-quinolinone(vesnarinone)in a human sailvary-cance cell line with mutant p53 qene." Cancer Letters. 112. 181-189 (1997)
[Publications] Mitsunobu Sato: "Induction of tumor differentiation and apoptosis,and Le^Y antige expression in treatment with differentiation-inducing agent,vesnarinone,of a patient with salivary adenoid cystic carcinoma" APOPTOSIS. (in press). (1997)
[Publications] Mitsunobu Sato: "Emergence of osteoblast-like cells in a neoplastic human salivar cancer cell line after treatment with 22-oxa-1α,25-dihydroxyvitarD_3." Cancer Letters. (in press). (1997)
[Publications] Hitoshi Kawamata: "Possible contribution of active MMP2 to lymph-node metastasis an secreted cathepsin L to bone invasion of newly established human oral cancer cell lines." Int.J.Cancer. 70. 120-127 (1997)
[Publications] Masayuki Azuma: "Lack of expression of transforming growth factor-β typeII recepto associated with malignant progression in human salivary gland cell clones." Int.J.Cancer. 66. 802-805 (1996)
[Publications] Masayuki Azuma: "Expression of integrin subunits in normal and malignant human salivary gland cell clones and its regulation by transforming growth factor-β1." Cancer Letters. 109. 91-99 (1996)
[Publications] Masayuki Azuma: "Different signaling pathways involved in transforming growth factor-β 1-indueed morphologic change and type IV collagen systhes in SV40-immortalized normal human salivary gland duct and myoepithelial cell clones" Arch.Oral.Biol.4. 413-424 (1996)
[Publications] Masayuki Azuma: "Increosed matrix metalloproteinase-2 activity induced by TGF-β1 in duct cells of human salivary gland is associated with the development of cyst formation in vivo." J.Oral Pathol.Med. 25. 467-473 (1996)

1996 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト唾液腺癌細胞における新規な薬物受容体の検出と分化・アポトーシス誘導機構

Principal Investigator

佐藤 光信 徳島大学, 歯学部, 教授 (00028763)

Research Products

[Publications] Mitsunobu Sato: "Induction of cyclin-dependent kinase inhibitor,p21^<WAF1> by treatment with 3,4-dihydro-6-[4-(3,4-dimethoxybenzoyl)-1-piperazir2(1H)-quinolinone(vesnarinone)in a human sailvary-cance cell line with mutant p53 qene." Cancer Letters. 112. 181-189 (1997)

[Publications] Mitsunobu Sato: "Induction of tumor differentiation and apoptosis,and Le^Y antige expression in treatment with differentiation-inducing agent,vesnarinone,of a patient with salivary adenoid cystic carcinoma" APOPTOSIS. (in press). (1997)

[Publications] Mitsunobu Sato: "Emergence of osteoblast-like cells in a neoplastic human salivar cancer cell line after treatment with 22-oxa-1α,25-dihydroxyvitarD_3." Cancer Letters. (in press). (1997)

[Publications] Hitoshi Kawamata: "Possible contribution of active MMP2 to lymph-node metastasis an secreted cathepsin L to bone invasion of newly established human oral cancer cell lines." Int.J.Cancer. 70. 120-127 (1997)

[Publications] Masayuki Azuma: "Lack of expression of transforming growth factor-β typeII recepto associated with malignant progression in human salivary gland cell clones." Int.J.Cancer. 66. 802-805 (1996)

[Publications] Masayuki Azuma: "Expression of integrin subunits in normal and malignant human salivary gland cell clones and its regulation by transforming growth factor-β1." Cancer Letters. 109. 91-99 (1996)

[Publications] Masayuki Azuma: "Different signaling pathways involved in transforming growth factor-β 1-indueed morphologic change and type IV collagen systhes in SV40-immortalized normal human salivary gland duct and myoepithelial cell clones" Arch.Oral.Biol.4. 413-424 (1996)

[Publications] Masayuki Azuma: "Increosed matrix metalloproteinase-2 activity induced by TGF-β1 in duct cells of human salivary gland is associated with the development of cyst formation in vivo." J.Oral Pathol.Med. 25. 467-473 (1996)

佐藤光信徳島大学, 歯学部, 教授 (00028763)