マスト細胞プロテアーゼmRNAの発現をマーカーとしたマスト細胞の多様性の解析

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06454193
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 北村 幸彦 大阪大学, 医学部, 教授 (70028520)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 辻村 亨 大阪大学, 医学部, 助手 (20227408) ; 廣田 誠一 大阪大学, 医学部, 助手 (50218856) ; 野村 慎太郎 大阪大学, 医学部, 助教授 (80159087) ; 実宝 智子 大阪大学, 医学部, 助手 (70252658) ; 春日井 努 大阪大学, 医学部, 助手 (80214310)
• Keywords: マスト細胞 / マスト細胞プロテアーゼ / 転写因子 / in situ ハイブリダイゼーション / 寄生虫感染 / 結合組織マスト細胞 / 粘膜型マスト細胞 / トリプターゼ

Research Abstract

マウスの骨髄をT細胞由来のマスト細胞増殖因子の存在下で培養し、培養マスト細胞を得た。この培養マスト細胞からRNAを抽出し、cDNAに転換後PCRを用いて、マウスマスト細胞プロテアーゼ(MMCP)のうち、MMCP-2、MMCP-4、MMCP-6とマスト細胞カルボキシペプターゼA(MC-CPA)のcDNA断片を得た。マスス皮膚のパラフィン切片を作製後、ディゴキシゲニンでラベルしたRNAプローブを用いて、in situハイブリダイゼーションを行った。正常マウスの皮膚ではMMCP-4、MMCP-6、MC-CPAのシグナルがマスト細胞でみとめられ、他種類の細胞ではみとめられないので、この方法の特異性は高いと考えられた。つぎにマスト細胞が分化形質の異常を示すことが知られているmi/miマウスの皮膚をこの方法で調べてみた。mi/miマウスの皮膚のマスト細胞はヘパリン含量が少ないため、アルシアンブルーでは染色されるものの、ベルベリン硫酸では染色されない。このmi/miマウスの皮膚のマスト細胞はMC-CPAのmRNAを発現するもののMMCP-6のmRNAの発現はみとめられず、mi/miマウスの皮膚のマスト細胞における分化異常が、マスト細胞のプロテアーゼの発現という最も直接的な方法により確認された。mi遺伝子座はbasic-helix-loop-helix leucine zipper型転写因子をコードしていることがわかっているが、MMCP-6の遺伝子の上流には、mi転写因子が結合する塩基配列があり、MMCP-6遺伝子の転写には、mi転写因子の結合が必要であることも示された。またMMCP-2、MMCP-4、MMCP-6を用いたin situハイブリダイゼーションにより、少なくとも皮膚と消化管粘膜に存在するマスト細胞の分化形質は区別できることが明らかになった。

Research Products

• [Publications] Koshimizu,Uichi: "Wn mutation of c-kit receptoraffects its post-transcriptional processing and extracellular expression." Oncogene. 9. 157-162 (1994)
• [Publications] Tei,Hideki: "Characterization of mast cells derived from Ws/Ws mast cell deficient rats with a small deletion at kinase domain of c-kit." Blood. 83. 916-925 (1994)
• [Publications] Tsujimura,Tohru: "Ligand-independent activation oh c-kit receptor tyrosine kinase in a murine mastocytoma cell line p-815 by point mutation." Blood. 83. 2619-2626 (1994)
• [Publications] Yamazaki,Masaru: "c-kit gene is expressed by skin mast cells in embryos but not in puppes of Wsh/Wsh mice:age-dependent c-kit qene expression." Blood. 83. 3509-3516 (1994)
• [Publications] Isozaki,Koji: "Cell type-specific deficiency of c-kit gene expression in mutant mice of mi/mi qenotype." American Journal of Pathology. 145. 827-836 (1994)
• [Publications] Kasugai,Tsutomu: "Infection of Nippostrongylus brasilinesis induces invasion of mast cell precursors from peripheral blood to small intestine." Blood. (in press).
• [Publications] Kitamura,Yukihiko: "Immunobiology in Otorhionolaryngology" Kugler Publications, 674 (1994)
• [Publications] Kitamura,Yukihiko: "Biological and Molecular Aapects of Mast Cell and Basophil Differentiation and Funtion" Raven Press(in press),