1995 Fiscal Year Annual Research Report
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06454309
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| Research Institution | Osaka Medical College |
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Principal Investigator |
玉井 浩 大阪医科大学, 医学部, 講師 (30179874)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
荻原 亨 大阪医科大学, 医学部, 助手 (00211128)
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| Keywords | A群色素性乾皮症 / DNA修復蛋白質 / XPA蛋白質 / ERCC1蛋白質 / yeast two-hybrid system / E-cluster region / フィルターバインデイング アッセ- / DNA結合能 |
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| Research Abstract |
A群色素性乾皮症(XP)における臨床症状の差異を検討するために、他のDNA修復蛋白質とXPA蛋白質との相互作用をまず酵母のtwo-hybrid systemによつて検討したところ、ERCC(excision repair cross complementing)1蛋白質との間に相互作用を認めた。XPA,ERCC1蛋白質間の相互作用をトランスフォーマントのβ-galactosidaseの活性で検討したところ、ERCC1、XPA4-129の組み合わせにおいてβ-galactosidaseの活性の上昇を認めた。そこでin vitroの実験系においてこの相互作用を確かるために、GST融合蛋白質としてXPA、ERCC1蛋白質を大腸菌の系にて発現させ、それぞれHeLe細胞の抽出液および精製したXPA蛋白質との結合の有無を検討したところin vitroにおいてもXPA、ERCC1蛋白質の直接的な相互作用を認めた。またXPA蛋白質のN末端のE-cluster regionがERCC1蛋白質との相互作用に関与しているとも明らかにした。フィルターバインデイングアッセ-によりERCC1蛋白質の存在下でXPA蛋白質のDNA結合能は、高まるがE-cluster regionを含む蛋白間の相互作用部位を欠損したXPA蛋白質(しかしこの蛋白質のDNA結合能は、保持されている)では、ERCC1蛋白質が共存しても、そのDNA結合能は、変化しないことも明らかにできた。
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