1995 Fiscal Year Annual Research Report
ランダムシーケンスによる角結膜上皮細胞の遺伝子発現の解析
Project/Area Number |
06454500
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Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
Principal Investigator |
木下 茂 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (30116024)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大久保 公策 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (40233069)
西田 幸二 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (40244610)
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Keywords | ヒト / 角膜上皮細胞 / cDNAライブラリー / ランダムシーケンス / 遺伝子発現 / 既知遺伝子 / 未知遺伝子 / in vivo |
Research Abstract |
前年度に作成した角膜上皮のgene expression profileの中で,2つの遺伝子について解析した。第1は角膜上皮で最も発現頻度が高いGS02186であった。GenBankに対するDNAデータベースマッチでは,本遺伝子はapolipoprotein J(apoJ)であった。本研究では,粘膜上皮(角膜上皮,結膜上皮,膣上皮,食道上皮,胃粘膜上皮,小腸上皮,結腸上皮),表皮を標本として,apoJのmRNAおよび蛋白の発現をRT-PCR,in situ hybridization,免疫組織化学法で検討した。その結果,apoJmRNAは角膜上皮,結膜上皮,膣上皮,食道上皮で発現していたが,表皮では発現を認めなかった。また,角膜におけるapoJmRNAの局在部位は,主として基底細胞であった。apoJ蛋白は上記の粘膜上皮すべての表層部位に局在していたが,表皮には局在を認めなかった。以上から,apoJは眼表面で産生され,上皮の表層部位に局在して,何らかの生理的機能を果している物質であることが示された。 第2は角膜上皮に特異的で,データベースマッチのない未知遺伝子のうち,最も発現頻度が高いGS08025であった。GS08025は3′未満の部分的なcDNAで,それをプローブとして本遺伝子の全長のcDNAのクローニングを行った。その結果,ORFは498個のアミノ酸をコードしており,マウス,ウサギの角膜上皮特異的なケラチンK12と高い相同性を示した。本遺伝子はヒトのK12であると考えられた。 なおin vivo結膜上皮のcDNAライブラリー作成については,血液・上皮下組織の混入によるアーチファクトの除去に関して検討中である。
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Research Products
(7 results)
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[Publications] Nishida K: "A gene expression profile of human corneal epthelium and the isolation of human keratin 12 cDNA." Investigative Ophthalmology & Visual Science. submitted.
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[Publications] Nishida K: "Apolipoprotein J expression in human ocular surface epithelium." Investigative Ophthalmology & Visual Science. submitted.
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[Publications] Nishida K: "SP-40,40 expression in human corneal epithelium." Ocular Cell & Molecular Biology Symposium II(San Diego,USA),Abstract. 24 (1995)
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[Publications] Kokawa N: "High total TGF-β2 levels in normal human tears." Current Eye Research. in press.
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[Publications] Sotozono C.: "Keratinocyte growth factor accelerate corneal epithelial wound healing in vivo." Investigative Ophthalmology & Visual Science. 36. 1524-1529 (1995)
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[Publications] Nishida K: "Transforming growth factor-β1,-β2,-β3mRNA expression in human cornea." Current Eye Research. 14. 235-241 (1995)
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[Publications] 木下茂(編集): "角膜疾患の細胞生物学" メジカルビュー, (1995)