1994 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト血小板及びラット唾液腺の分泌を調節する低分子量GTP結合蛋白質に関する研究

Research Project

Project/Area Number	06780500
Research Institution	Gifu University
Principal Investigator	永田浩一岐阜大学, 医学部, 助手 (50252143)
Keywords	巨核球系培養細胞(MEG-01) / 血小板 / 低分子量GTP結合蛋白質 / 三量体型GTP結合蛋白質 / 細胞分化 / ram p25 / Rac2 / Rallp
Research Abstract	1.血小板のモデル細胞系としてホルボールエステルにより分化誘導させたヒト巨核球系培養細胞MEG-01を用いて、各種G蛋白質などシグナル分子の分化誘導に伴う変動・分泌応答への関与について検討した。 1)PMA処理により分化させたMEG-01細胞を用いてトロンビン刺激し、血小板α顆粒内蛋白質であるβ-トロンボグロブリンの産生・分泌を調べたが、著明な分泌亢進は認められなかった。 2)MEG-01細胞は、三量体型G蛋白質、Gs,Gi_2,Gi_3,Gz,G_<11>G_<12>のαサブユニットおよびβサブユニットが蛋白質レベルで検出された。MEG-01細胞のPMAによる分化誘導により、三量体型G蛋白質のGi_2α,Gi_3αおよびGβが日のオーダーで漸増したが、他のものはほとんど変化しなかった。一方、低分子量G蛋白質のRac2は、PMA処理後30分から著明に増加した。 3)PMA処理したMEG-01細胞から出現する血小板様顆粒を収集し、その低分子量G蛋白質のmRNAおよび蛋白質レベルでの発現を検討した。rap1A,rap1B,rap2B,ralA,rhoA,rac1,rac2,CDC42Hs,rab1,rab3B,rab4,rab6,ramおよびranについてRT-PCRを行ったところ、rab4以外のすべてのDNAの増幅を認めた。また、Rap1,RhoA,Rac,CDC42,Rab6,Rab8について蛋白質レベルでの発現が確認された。 4)MEG-01細胞においてPKC-γ以外のPKCα,-βI,-βII,-δ,-ε,-η,-θおよび-ζの発現を認めたが、顆粒中にはPKC-γおよび-ζタイプが検出されなかった。蛋白質レベルで血小板に検出されるサブタイプはPKCα,-βI,-βIIおよび-ζであるが、顆粒中には量的に少ないがいずれも発現していた。MEG-01細胞では、上記4種に加えてPKC-εおよび-θが検出された。 2.ラット唾液腺細胞の細胞分画により低分子量型Rap1pが顆粒膜に、三量体型G蛋白質Gtは形質膜に局在することが明らかとなった。

Research Products
(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] Nagata,K-i.: "Possible interaction of haemoglobin with a low Mr GTP-binding protein,ram p25." Biochem.Mol.Biol.Intl. (in press).
[Publications] Nagata,K-i.: "Cloning of cDNAs encoding a cell-cycle-regulatory GTP-binding low-Mr_r(GBLM)protein,Ran/TC4 from micronucleated Tetrahymena thermophila and amicronucleated Tetrahymena pyriformis." Gene. 144. 123-125 (1994)
[Publications] Y.Kameyama: "Localization of a low Mr GTP-binding protein,rap1 protein,in plasma membranes and secretory granule membranes of rat parotid gland." Life Sciences. 55. 213-219 (1994)
[Publications] K.-i.Nagata.: "Haemoglobin inhibits GTP-hydrolysis and GDP/GTP-exchange activities of a low M_r GTP-binding protein,ras p21." Brit.J.Haematol.88. 706-711 (1994)
[Publications] K.-i.Nagata: "Subucellular localization of a low Mr GTP-binding protein,c25KG,in resting and stimulated human platelets." Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 1081-1088 (1993)

1994 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト血小板及びラット唾液腺の分泌を調節する低分子量GTP結合蛋白質に関する研究

Principal Investigator

永田 浩一 岐阜大学, 医学部, 助手 (50252143)

Research Products

[Publications] Nagata,K-i.: "Possible interaction of haemoglobin with a low Mr GTP-binding protein,ram p25." Biochem.Mol.Biol.Intl. (in press).

[Publications] Nagata,K-i.: "Cloning of cDNAs encoding a cell-cycle-regulatory GTP-binding low-Mr_r(GBLM)protein,Ran/TC4 from micronucleated Tetrahymena thermophila and amicronucleated Tetrahymena pyriformis." Gene. 144. 123-125 (1994)

[Publications] Y.Kameyama: "Localization of a low Mr GTP-binding protein,rap1 protein,in plasma membranes and secretory granule membranes of rat parotid gland." Life Sciences. 55. 213-219 (1994)

[Publications] K.-i.Nagata.: "Haemoglobin inhibits GTP-hydrolysis and GDP/GTP-exchange activities of a low M_r GTP-binding protein,ras p21." Brit.J.Haematol.88. 706-711 (1994)

[Publications] K.-i.Nagata: "Subucellular localization of a low Mr GTP-binding protein,c25KG,in resting and stimulated human platelets." Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 1081-1088 (1993)

永田浩一岐阜大学, 医学部, 助手 (50252143)