2006 Fiscal Year Annual Research Report
DNA合成酵素の分子種特異的阻害物質の探索とケミカルノックアウト解析
Project/Area Number |
06J01887
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Research Institution | Kobe Gakuin University |
Principal Investigator |
栗山 磯子 神戸学院大学, 食品薬品総合科学研究科, 特別研究員(DC1)
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Keywords | DNAポリメラーゼ / 阻害剤 / ケミカルノックアウト |
Research Abstract |
Humaninは24個のポリペプチド化合物であるため,アラニン・スキャン(各アミノ酸をアラニンに置換した化合物24種類を合成)を行った結果,Pol.阻害活性に必須なアミノ酸残基が同定された.またN末側とC末側のアミノ酸を1つずつ短くしたものを合成して,阻害活性に必須なアミノ酸領域を解明した.Pol.反応の基質には合成DNAであるpoly(dA)/oligo(dT)12-18と放射性デオキシヌクレオチドである[3H]-dTTPを用いて、Pol.によるRIの取り込みを液体シンチレーションカウンター(LSC Packard 2300TRを使用、本学で所有・RI実験室で共同利用)で測定する方法で実施した.細胞内に導入するために,Humaninに塩基性ペプチドをつけた物質の化学合成を行った.これと塩基性ペプチドがついていないHumaninとPol.βにおける阻害活性に違いがないかを確認するためにDNA合成酵素の阻害活性を調査した結果、塩基性ペプチドをつけたHumaninがついていないHumaninよりも強く阻害することがわかった.マウス線維芽細胞であるNIH3T3細胞を用いてHumaninの細胞毒性試験を行い,実験に使用するHumanin濃度は2μMが適当だと考えられた.現在,DNA損傷を起こしていないNIH3T3細胞へHumaninを加え,Humaninの細胞内局在,Pol.各種との多重免疫染色およびその他の細胞内小器官や修復に関わる蛋白質の免疫染色を行い,その影響を見るための予備実験を行っているところであり,Humaninを細胞に加えてからの培養時間,固定の方法,浸透の時間等の細かい条件を検討している.
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Research Products
(7 results)
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[Journal Article] Inhibitory effect of tocotrienol on eukaryotic DNA polymerase lambda and angiogenes is.2006
Author(s)
Mizushina Y, Nakagawa K, Shibata A, Awata Y, Kuriyama I, Shimazaki N, Koiwai O, Uchiyama Y, Sakaguchi K, Miyazawa T, Yoshida H.
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Journal Title
Biochem Biophys Res Commun. 339(3)
Pages: 949-55
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[Journal Article] 5-(Hydroxymethyl)-2-furfural : a selective inhibitor of DNA Polymerase lambda and terminal deoxynucleotidyltransferase.2006
Author(s)
Mizushina Y, Yagita E, Kuramochi K, Kuriyama I, Shimazaki N, Koiwai O, Uchiyama Y, Yomezawa Y, Sugawara F, Kobayashi S, Sakaguchi K, Yoshida H.
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Journal Title
Arch Biochem Biophys 446(1)
Pages: 69-76
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[Journal Article] Structural relationship of curcumin derivatives binding to the BRCT domain of human DNA polymerase lambda.2006
Author(s)
Takeuchi T, Ishidoh T, Iijima H, Kuriyama I, Shimazaki N, Koiwai O, Kuramochi K, Kobayashi S, Sugawara F, Sakaguchi K, Yoshida H, Mizushina Y.
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Journal Title
Genes Cells. 11(3)
Pages: 223-35
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[Journal Article] Beta-sitosterol-3-0-beta-D-glucopyranoside : a eukaryotic DNA polymerase lambda inhibitor.2006
Author(s)
Mizushina Y, Nakanishi R, Kuriyama I, Kamiya K, Satake T, Shimazaki N, Koiwai O, Uchiyama Y, Yonezawa Y, Takemura M, Sakaguchi K, Yoshida H.
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Journal Title
J Steroid Biochem Mol Biol. 99(2-3)
Pages: 100-7
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[Journal Article] Anti-tumor effects of dehydroaltenusin, a specific inhibitor of mammalian DNA polymerase alpha.2006
Author(s)
Maeda N, Kokai Y, Ohtani S, Sahara H, Kuriyama I, Kamisuki S, Takahashi S, Sakaguchi K, Sugawara F, Yoshida H, Sato N, Mizushina Y.
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Journal Title
Biochem Biophys Res Commun. 352(2)
Pages: 390-6
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