2006 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
06J07909
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Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
Principal Investigator |
柘植 陽太 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 特別研究員(DC2)
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Keywords | コリネ型細菌 / バイオマス |
Research Abstract |
コリネ型細菌はアミノ酸生産等の分野で最も多用される産業微生物である。本菌は溶菌しにくく、増殖力が高い、また、菌体外プロテアーゼ等の分泌がほとんど認められないことから異種タンパク質生産の宿主として非常に有能であると考えられる。高いセルロース分解活性を有するセルラーゼ複合体としてClostridium属が産生するセルロソームが知られている。しかし、C.cellulovoransは嫌気性細菌であるため、増殖力等の問題から実用化は困難である。そこで本研究はセルロースを高効率に分解するコリネ型細菌の作製のため、C.glutamicumにおけるC.cellulovorans由来のセルロソームの発現分泌系確立を目的としている。本年度はC.glutamicumの細胞表層タンパク質PS2のシグナルペブチドを用いてTrichoderma reesei由来のendoglucanaseの分泌発現を試みた。T.reeseiの有するendoglucanase III、 IV、Vをクローニングし、クロスオーバーPCR法を用いてシグナル配列との融合遺伝子を作製してC.glutamicum R株に導入した。CMCを基質とし、Congo redを用いたplate assayによりendoglucanase IIIの分泌、セルラーゼ活性を確認した。また、α-アミラーゼの分泌をヨウ素でんぷん反応で検出するスクリーニング系により、コンピュータプログラムで分泌シグナルの存在が予測された310遺伝子のうち、88個が分泌能を有することが分かった。そのうち22個は他と比較して高い分泌能力を有していた。今後はC.cellulovoransの有するセルロソーム遺伝子群(CbpA、EngB等)と高分泌シグナル配列との融合遺伝子を作製し、分泌、セルラーゼ活性を確認する予定である。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] Comparative analysis of the Corynebacterium glutamicum Group and complete genome sequence of strain.2007
Author(s)
Yukawa H., Omumasaba C.A., Nonaka H., Kos P., Okai N., Suzuki N., Suda M., Tsuge Y., Watanabe J., Ikeda Y., Vertes A.A., Inui M.
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Journal Title
Microbiology 153
Pages: 1042-1058
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[Journal Article] High throughput transposon mutagenesis and construction mutant library of Corynebacterium glutamicum.2006
Author(s)
Suzuki, N., Okai, N., Nonaka, H., Tsuge, Y., Inui, M., Yukawa, H.
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Journal Title
Appl Environ Microbiol 72
Pages: 3750-3755