1996 Fiscal Year Annual Research Report
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07044265
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
田中 亀代次 大阪大学, 細胞生体工学センター, 教授 (80144450)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大熊 芳明 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (70192515)
西條 將文 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (90221986)
安井 明 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (60191110)
花岡 文雄 大阪大学, 細胞生体工学センター, 教授 (50012670)
WOOD Richard 王立癌研究所, 主任研究員
HOEIJMAKERS ヤン エイチ ジェイ エラスムス大学, 医学部, 教授
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| Keywords | DNA修復 / 2ハイブリドシステム / 色素性乾皮症 / 遺伝子ターゲティング / ノックアウトマウス / コケイン症候群 / 酵母ホモログ / 紫外線 |
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| Research Abstract |
1、田中は、酵母のtwo hybrid systemを用いてXPA(色素性乾皮症A群)蛋白質と結合する新規の蛋白質、XAB2蛋白質(XPA-Binding Protein2)を同定した。HeLa細胞粗抽出液から、抗XAB2蛋白質抗体によりXPA蛋白質が免疫共沈降でき、また、抗XPA蛋白質抗体によりXAB2蛋白質が免疫共沈降でき、細胞内でのXPAとXAB2の結合を確認した。そして、田中とHoeijmakersは共同実験により、XAB2がCSAやCSB(コケイン症候群のAとB群)とも結合するすることを明かにした。CSは、転写ないし転写と共役した修復機構に異常をもつことが知られており、XAB2がこれらの機構に重要な役割を担うことが示唆された。
2、田中が作成したXPA欠損マウスとHoeijmakersが作成したCSB欠損マウスを交配し、XPA/CSBダブル欠損マウスを樹立した。それぞれ単独の欠損では、ヌクレオチド除去修復能を欠損しているものの、マウスは大きな病理学的、形態学的異常や行動の異常を示さなかったのに対し、XPA/CSBダブル欠損マウスは生後20日以内に死亡した。このことは、XPAとCSBの関与する機構が異なり、それらが同時に欠損するとマウスは致死になることを示唆する。
3、花岡は、XPC蛋白質を精製しその遺伝子をクローニングするとともに、XPCと強固に結合する58kDaの蛋白質も精製した。花岡とHoeijmakersは共同実験を行い、58kDaの蛋白質が酵母RAD23DNA修復蛋白質のヒトホモログ(HHR23B)であることをみつけた。さらに、花岡とHoeijmakers、Woodは共同研究で、HHR23BおよびそのホモログHHR23Aもヌクレオチド除去修復の素過程に必須であることを明かにした。
4、安井は、ショウジョウバエなどの光回復酵素遺伝子と相同性の高い遺伝子をヒト、マウスからクローニングした。安井はHoeijmakersと共同して、光回復酵素遺伝子のマウスホモログ遺伝子をノックアウトしたマウスを作成しつつある。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Saijo,M.: "Sequential binding of DNA repair proteins RPA and ERCCl to XPA in vitro." Nucl.Acid.Res.24. 4719-4724 (1996)
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[Publications] van der Spek,P.J.: "Cloning,Tissue expression,and mapping of a human photolyase homolog with similarity to plant bule-light receptors." Genomics. 37. 177-182 (1996)
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[Publications] Nagai,A.: "Enhancement of damage-specific DNA binding of XPA by interaction with the ERCCl DNA repair protein." Biochem.Biophys.Res.Commun.211. 960-966 (1995)
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[Publications] Sijbers,A.M.: "Xeroderma pigmentosum group F caused by defect in a structure-specific DNA repair endonuclease." Cell. 86. 811-822 (1996)
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[Publications] Sugasawa,K.: "HHR23B,a human RAD23 homolog,stimulates XPC protein in nucleotide excision repair in vitro." Molec.Cell.Biol.16. 4852-4861 (1996)
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[Publications] van der Horst,G.T.J.: "Defective transcription-coupled repair in Cockayne Syndrome B mice is associated with skin cancer predisposition." Cell. (in press).
