1995 Fiscal Year Annual Research Report

基底膜の生物学的機能

Research Project

Project/Area Number	07044268
Research Institution	Okayama University
Principal Investigator	二宮善文岡山大学, 医学部, 教授 (70126241)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	スークポール・オウハーバード大学, 医学部, 研究員マットウオルマンハーバード大学, 医学部, 研究員スニールアプラハーバード大学, 医学部, 研究員百田龍輔岡山大学, 医学部, 助手 (80263557) 大橋俊孝岡山大学, 医学部, 助手 (50194262) ビヨンオルセンハーバード大学, 医学部, 教授
Keywords	cDNAライブラリー / IV型コラーゲン / モノクローン抗体 / ホモロガスリコンビネーション / ノックアウトマウス
Research Abstract	1)マウスライブラリーよりα6(IV) cDNAの重複クローンを単離した。その結果マウスα6(IV)ポリペプチドの2/3の一次構造を決定することが出来た。 2)決定されたマウスα6(IV)ポリペプチド部分をヒトのそれと比較すると、全体として約70%のホモロジーが得られた。これをもとに、マウスα6(IV)ポリペプチドの第三番目のコラーゲン配列の乱れの部分(インパーフェクション)のアミノ酸配列に注目し、このアミノ酸配列を有するペプチドを合成し、このペプチドに対する特異的モノクローン抗体を作成した。この抗体は、マウスα6(IV)ポリペプチドに反応することを免疫組織化学間接法によって確認することができた。 3)上記の如く特異抗体が作成されたため、現在マウス発生初期における免疫組織学的検索を進めている。 4)マウス遺伝子DNA断片を単離できた。これは、エクソン1と2を含んだ24kbの長さの断片であった。ヒトの同じ部位をコードする遺伝子断片と比較すると、面白いことに、マウスではヒトでみられるような二つの転写産物は存在しなかった。このことにより、マウスの遺伝子では、Col4a5とCol4a6の間は約1.5kbとなり、この両遺伝子の間に両遺伝子の転写発現を調節する二方向性のプロモーターが存在することになる。 5)ノックアウトマウス作成のために、マウス遺伝子DNA断片よりエクソン2を除き、代りにNeo^R遺伝子を挿入したコンストラクトを作成した。作成したコンストラクトがジーンターゲッテイングの目的達成のために必要なコンストラクトであることを確認した。また他の方法によるジーンターゲッテイングのためのコンストラクト作成も試みている。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Sado Y.: "Establishment of epitope-defined monoclonal antibodies recognizing the six different a chains of human type IV collagen by the rat lymph node method." Histochemistry and Cell Biology. 104. 267-275 (1995)
[Publications] Ninomiya Y.: "Differential expression of two basement membrane collagen genes,COL4A6 and COL4A5,demonstrated by immunofluorescence staining using peptide-specific monoclonal antibodies." J.Cell Biol.130. 1219-1229 (1995)
[Publications] Oohashi T.: "Isolation and structure of genomic DNA encoding the human α6 (IV) collagen chain and comparison with other type IV collagen genes." J.Biol.Chem.270. 26863-26867 (1995)
[Publications] Sugihara K.: "Experimental Anti-GBM glomerular nephritis induced in rats by immunization with syhthetic peptides based on six a chains of human type IV collagen." J.Pathol.178(in press). (1996)
[Publications] Ljubimov A.V.: "Extracellular alterations in human corneas with bullous keratopathy." Invest.Ophthal mol.Vis.Sci.(in press). (1996)
[Publications] 二宮善文: "新しい基底膜コラーゲンα(IV)鎖とその遺伝子発現" 生化学, 1301-1307 (1995)
[Publications] Karl Tryggvason and Yoshifumi Ninomiya: "Alport Syndrome (Hereditary Nephritis) In Clinical Studies in Medical Biochemistry,Eds.by Glew R.H.and Ninomiya Y." Oxford University Press,New York (in press), (1996)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

基底膜の生物学的機能

Principal Investigator

二宮 善文 岡山大学, 医学部, 教授 (70126241)

Research Products

[Publications] Sado Y.: "Establishment of epitope-defined monoclonal antibodies recognizing the six different a chains of human type IV collagen by the rat lymph node method." Histochemistry and Cell Biology. 104. 267-275 (1995)

[Publications] Ninomiya Y.: "Differential expression of two basement membrane collagen genes,COL4A6 and COL4A5,demonstrated by immunofluorescence staining using peptide-specific monoclonal antibodies." J.Cell Biol.130. 1219-1229 (1995)

[Publications] Oohashi T.: "Isolation and structure of genomic DNA encoding the human α6 (IV) collagen chain and comparison with other type IV collagen genes." J.Biol.Chem.270. 26863-26867 (1995)

[Publications] Sugihara K.: "Experimental Anti-GBM glomerular nephritis induced in rats by immunization with syhthetic peptides based on six a chains of human type IV collagen." J.Pathol.178(in press). (1996)

[Publications] Ljubimov A.V.: "Extracellular alterations in human corneas with bullous keratopathy." Invest.Ophthal mol.Vis.Sci.(in press). (1996)

[Publications] 二宮善文: "新しい基底膜コラーゲンα(IV)鎖とその遺伝子発現" 生化学, 1301-1307 (1995)

[Publications] Karl Tryggvason and Yoshifumi Ninomiya: "Alport Syndrome (Hereditary Nephritis) In Clinical Studies in Medical Biochemistry,Eds.by Glew R.H.and Ninomiya Y." Oxford University Press,New York (in press), (1996)

二宮善文岡山大学, 医学部, 教授 (70126241)