デング出血熱発病機構に関係するウイルス遺伝子の塩基配列解析

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07457078
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 五十嵐 章 長崎大学, 熱帯医学研究所, 教授 (40029773)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 長谷部 太 長崎大学, 熱帯医学研究所, 助手 (20253693)
• Keywords: デング出血熱 / 発病機構 / ウイルス遺伝子 / 塩基配列 / アミノ酸配列 / 3′非コード領域 / 毒力 / タイ国

Research Abstract

1,解析したデングウイルス株:2型デングウイルス(D2)4株中、ThNH7/93は最も重症のデングショック症候群(DSS)から、ThNH28/93はデング出血熱(DHF)重篤度IIから、ThNH52/93はDHF重篤度Iから、ThNHp11/93は軽症のデング熱(DF)患者から分離された。4型デングウイルス(D4)4株中、CT-74はDHF重篤度IIから、CT-129とCT-158はDHF重篤度Iから、CT-77はDF患者から分離された。
2,塩基配列の解析:各株をC6/36細胞で増殖後、感染培養液からウイスルRNAを抽出し、RT-PCRで増幅し、クローニング、又は直接、蛍光色素標識ダイデオキシ法で塩基配列を解析し、解析した。
3,結果
1)D2株の解析:構造蛋白質および非構造蛋白質の1つ(NS1)において、株特異的で蛋白質の性質に重大な影響を与えるアミノ酸変異としては、NS1領域の1053番目のAsp→Gly置換はDSS株特異的であり、PrM領域130番目のIIe→Arg置換はDF株特異的であった。非コード領域において、5′非コード領域は全株で完全に保存されたいたが、3′非コード領域の末端から297-299番目の塩基置換(TCG→CAA)の結果、DF株に予想される2次構造がDSS,DHF株と大きく異なっていた。
2)D4株解析:構造蛋白質およびNS1において、株特異的で蛋白質の性質に重大に影響を与えるアミノ酸変異としては、PrM領域145番目のAsn→His置換、E領域470番目のLeu→Trp置換、E領域520番目のLys→Thr置換、E領域598番目のThr→Ala置換がDHF重篤度II株特異的であり、PrM領域136番目のLeu→Phe置換、NS1領域914番目のSer→Phe置換、NS1領域1042番目のHis→Gln置換はDF株特異的であった。
4,考察:本研究によって発見された株特異的で蛋白質の性質又は3′非コード領域の2次構造に重大な変化を与えると予想される変異を、他の分離株でも確認すること、及び、今回の結果とウイスル株の生物学的性状ないしは発病機構との関係解析が今後の課題である。

Research Products

• [Publications] Kyaw Zin Thantほか: "Sequences of E/NS1 gene junction from four dengue-2 viruses of North-eastern Thailand and their evolutionary relationships with other dengue-2 viruses" Microbiology and Immunology. 39(8). 581-590 (1995)
• [Publications] Kyaw Zin Thantほか: "Detection of the disease severity-related molecular differences among new Thai dengue-2 isolates in 1993,based on their structural proteins and major non-structural proten NS1 sequences" Microbiology and Immunology. 40(3). 201-216 (1996)
• [Publications] M.N.M.Mangadaほか: "Sequences of terminal non-coding regions from four dengue-2 viruses isolated from patients exhibiting different disease severities" Virus Genes. 14(1). 5-12 (1996)
• [Publications] 五十嵐 章: "日本脳炎とデング熱/デング出血熱" 医学のあゆみ. 177(13). 924-929 (1996)
• [Publications] 五十嵐 章: "アルボウイルス性疾患-デングウイルス感染症とダニ脳炎について-" 臨床とウイルス. 24(5). 363-370 (1996)
• [Publications] 五十嵐 章: "デング出血熱" 最新医学. 52(1). 60-67 (1997)
• [Publications] 五十嵐 章: "デング熱/デング出血熱" 医薬ジャーナル社(永武毅編集「輸入感染症」), 167(6) (1996)