異種動物の種特異的補体制御膜因子遺伝子導入動物の作成

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07557337
• Research Institution: Nagoya City University
• Principal Investigator: 岡田 則子 名古屋市立大学, 医学部, 助手 (20160682)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高木 弘 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (70154755) ; 橋本 俊 名古屋市立大学, 医学部, 助教授 (10094393) ; 岡田 秀親 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (30160683) ; 野中 勝 名古屋市立大学, 医学部, 助教授 (40115259)
• Keywords: トランスジェニックマウス / トランスフェクタント / ラットCrry / モルモット / 補体制御膜因子 / 補体反応

Research Abstract

1 補体は種特異的補体制御膜因子が存在する自己細胞では反応が強力に抑制され、それらを持たない侵入異物にのみ反応する仕組みになっている。これに対し異種細胞には自由に補体反応が起こるので、異種移植などでは補体による急性拒否反応がおこる。そこで、ラット補体制御因子512抗原(ラットCrry) cDNAをマウス、モルモット、ハムスターなどの受精卵(マウスではES細胞)に導入してトランスジェニック動物を作成し、異種移植実験用動物を開発するための基礎的検討を行った。また、新たにモルモット補体制御因子DAFやMCPのcDNAクローニングにも成功したので同様に検討を行った。
2 ハムスター由来CHO細胞、サル由来COS7細胞等にラットやモルモットの種特異的補体制御膜因子のcDNAをトランスフェクトしたトランスフェクタントを作成した。トランスフェクタントでの補体制御膜因子cDNAの転写発現量はノーザンブロッド法や半定量RT-PCR法で確認された。さらに細胞膜上への蛋白発現量をモノクローナル抗体を用いて免疫蛍光染色し、フローサイトメトリーで定量した。
3 発現させたラットCrryやモルモットDAFが種特異的に補体反応を抑制する程度を、それぞれのトランスフェクタント細胞にウサギで作成した抗CHO等の抗体を作用させた上でラットやモルモットの血清と反応させ、C3の沈着がトランスフェクタント細胞では強力に抑制されていることがフローサイトメトリー定量によって確認された。
4 ラットやモルモットの補体の反応を強力に抑制することを確認した培養細胞をラットやモルモット皮下、腎被膜下、肝臓等に接種してトランスフェクタント細胞の消長の継時的解析を現在検討中である。

Research Products

• [Publications] Nishikawa, K.: "Local inflammation caused by a monoclonal antibody which blocks the function of the rat membrane inhibitor of C3 convertase." J. Immunol.156. 1182-1188 (1996)
• [Publications] Fukuoka, Y.: "Molecular cloning of murine decay accelerating factor (DAF) by immunoscreening." Int. Immunol.8. 379-385 (1996)
• [Publications] Nakamura, M.: "Quantification of the CD55 and CD59, membrane inhibitors of complement on HIV-1 particles as a function of complement-mediated virolysis." Microbiol Immunol.40. 561-567 (1996)
• [Publications] Iwata, M.: "Complement plays an essential role in shock following intestinal ischaemia in rats." Clin. Exp. Immunol.106. 156-159 (1996)
• [Publications] Hosokawa, M.: "Molecular cloning of guinea pig membrane cofactor protein (MCP) : Preferential expression in testis." J. Immunol.157. 4946-4952 (1996)
• [Publications] Rogers, C. A.: "Expression and function of membrane regulators of complement on rat astrocytes in culture." Immunology. 88. 153-161 (1996)
• [Publications] Hayashi, S.: "Protection of guinea pig cells from rat complement-mediated lysis by the transfection of rat complement regulatory factor 512 gene." Xenotransplanmtation,. 3. 217-221 (1996)
• [Publications] Wu,X.: "IgM natural antibody against an asialo-oligosaccharide, gangliotetraose (Gg4) sensitizes HIV-I infected cells for cytolysis by homologous complement." Int. Immunol.8. 153-158 (1996)
• [Publications] Okada, N.: "Presence of IgM antibodies which sensitize HIV-1 infected cells to cytolysis by homologous complement in long term survivors of HIV-infection." Microbiol. Immunol.41(in press). (1997)
• [Publications] Akatsu, H.: "Unique expression of HRF20 (CD59) in human nervous tissue." Microbiol. Immunol.41(in press). (1997)
• [Publications] Nangaku, M.: "Overexpression of Crry protects mesangeal cells from complement mediated injury." J. Am. Soc. Nephrol.(in press). (1997)
• [Publications] 野中真弓: "分子アレルギー学 補体の分子生物学(分担)" Medical Review社(印刷中), (1997)