1995 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
07670702
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Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
Principal Investigator |
小林 高義 東京医科歯科大学, 医学部, 講師 (70115343)
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Keywords | 筋緊張性ジストロフィー / 三塩基対反復配列 / ミオトニン・プロテインキナーゼ / 神経・筋培養 / 筋小胞体 / ミオシン / アクチン / 免疫組織化学 |
Research Abstract |
1。MtPKの局在の検討。 MtPKのC末端領域の合成ペプチドを作成し、これをウサギに免疫して、ポリクローナル抗体を作成した。この抗体は、Western blotでは、70kDaの膜分画および55kDaの可溶性分画を認識した。MtPKの骨格筋における局在を検討するために、MtPKとアクチンあるいはミオシンとの2重染色を行い、共焦点レーザー顕微鏡で局在を検討し、MtPKは主としてI帯に存在すること、更に免疫電顕による検討から、SRのternminal cisternaeに強く存在することをあきらかにした。更に、培養ヒト筋細胞に胎児ラット脊髄片を併置した培養系を使用し、筋細胞の発達段階におけるMtPKの局在の変化を検討した。筋芽細胞では、MtPKははっきりと染色されず、筋管細胞では、核の周辺、細胞膜下にpatchyに存在し、神経支配を受け、横紋形成した筋線維ではMtPKとアクチンあるいはミオシンによる2重染色の共焦点レーザー顕微鏡による観察から、I帯に存在するようになり、MtPKが神経支配によるregulationを受けていることを初めてあきらかにした。 2。3塩基対反復配列の増大機構に関する研究 MtPK遺伝子の3塩基対反復配列の増大の機構が細胞分裂と関連しているか否かを明らかにするために、DM患者5例及びcontrol3例の生検筋の線維芽細胞の長期培養を行い、MtPKの3塩基対反復配列数に変化が見られるか否かサザンブロット法を用いて解析した。この結果、DM患者1例で培養の経過に伴いCTG repeatの明かな延長を認めた。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] T Kobayashi: "Myotonin Protein Kinase:Gene Product of Myotonic Dystrophy is Localized in Sarcoplasmic Reticulum of Skeletal Muscle" Neurology. 46(in press). (1996)
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[Publications] N Kameda: "Developmental Studies of Myotonin Protein Kinase(MtPK)in Cultured Human Muscle" Neurology. 46(in press). (1996)
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[Publications] M,Shimokawa: "Further Expansion of the Myotonic Dystrophy Gene CTG Repeat during Somatic Cell Proliferation in vitro" Neurology. 46(in press). (1996)