2007 Fiscal Year Annual Research Report
腫瘍由来の癌抑制タンパク質p53変異体に対する四量体安定化剤の開発とその機構解明
Project/Area Number |
07J01703
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Research Institution | Hokkaido University |
Principal Investigator |
野村 尚生 Hokkaido University, 大学院・理学院, 特別研究員(DC1)
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Keywords | Tumor Suppressor Protein p53 / Tetramerization / Stabilizer / Phage Display Library / Mutations / Avidin-Biotin Interaction / Folding / Peptide |
Research Abstract |
癌抑制タンパク質p53は393アミノ酸残基からなる転写因子で、外部からの放射線や紫外線などの遺伝毒性ストレスに応答して、細胞周期の停止やアポトーシスを誘導する。そのp53機能発現には四量体形成が必須である。p53の変異はヒト悪性腫瘍で最も多く認められる異常であり、四量体形成ドメイン(TD,31残基)中の23残基に38個もの変異が発見されている。当研究室では、これらp53四量体形成ドメイン変異体の立体構造と活性に関する研究を進あており、多くの変異体が高濃度では四量体を形成し得るが、その構造が不安定化していることを明らかにしている。そこで本研究では、四量体構造の安定化による変異型p53タンパク質の機能回復を目指し、変異型四量体構造の安定剤の開発とその安定化機構の解明を目指している。 当該年度においてp53TDペプチドに特異的に結合するアミノ酸配列をPhage Display Libraryから得ることに成功した。p53TDペプチドを直にELISAプレートに吸着させる方法を最初に実施したが、四量体構造を安定化させる配列を得ることが出来なかった。これは、p53TDペプチドを直にプレートに吸着させたことにより、p53四量体構造が阻害されたことが原因であると考えられる。そこで、ビオチン付加p53TDペプチドを用いて新たなスクリーニングの系を開発した。p53TDペプチドおよびビオチン付加p53TDペプチドを4:1の混合溶液として,refoldingさせることにより四量体中に一分子のビオチンを提示させる。アビジンビーズによりこのビオチン付加四量体をトラップし、Phageを加え、熱処理することによりp53四量体を解離させ、Phageをスクリーニングする。この方法により得られた短鎖ペプチドによってp53四量体構造を5℃程度安定化させることに成功した。
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Research Products
(16 results)