1997 Fiscal Year Annual Research Report
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08457305
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
井上 啓爾 長崎大学, 医学部・附属病院, 助手 (90274646)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高山 和之 長崎大学, 医学部・附属病院, 医員
兼松 隆之 長崎大学, 医学部, 教授 (40128004)
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| Keywords | TGF-β / 肝硬変 / 肝繊維症 |
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| Research Abstract |
平成8年度までに、TGF-βtypeIIレセプターの細胞外ドメインを、マウス線維芽細胞cDNA libraryよりRT-PCRを用いcloningし、SRαプロモーターをもつ発現vectorに組み込み、COS細胞に導入し、約40KDの可溶性II型レセプターproteinを上清に発現させた。また、TGF-β可溶型レセプターを精製し、125I-TGF-βと、in vitroにて反応させ、band shiftすることで、結合を確認した。さらに、ミンク肺上皮細胞(MvILu)培養液中にrecombinant TGF-βを投与すると増殖抑制作用がみられるが、これに可溶性TGF-βレセプターを投与することで、TGF-βの作用を中和する(増殖抑制を解除する)ことが弱いながらもできることが確認された。しかし、発現量が少ないため、平成9年度以降も引き続き、可溶性II型レセプターの発現効率を上げるように、II型レセプターのsignal peptideの改良(インターフェロンのsignal peptideへの置き換え)、また、C端末へのImmunoglobulin Fc領域の付加等を行ったが、細胞での発現効率は変わらなかった。
また同時に、大腸菌によるfusion protein作製を試み、発現vector可溶性レセプター遺伝子を組み込み、大腸菌に発現させたが、タンパクが長いため大腸菌では発現しなかった。平成10年度は、長いタンパクを発現可能なヴァキュロvirusを用いて、多量の蛋白の発現を試み、ラット肝硬変モデルを用いて、in vivoでの効果を検討したい。
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