1996 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト伊東細胞のコラゲン分解酵素、その阻害物質の遺伝子発現に及ぼすアルコールの効果
Project/Area Number |
08670613
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Research Institution | Nara Medical University |
Principal Investigator |
中野 博 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (60093283)
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Keywords | アルコール / 肝線維症 / MMP-2 / TIMP-1 / TIMP-2 |
Research Abstract |
アルコール性肝線維症に関するIV型コラゲン分解酵素の関与を検討することを目的に、私の考案した方法で切除肝より分離したヒト伊東細胞培養系を用い、IV型コラゲン分解酵素であるmatrix metalloproteinase-2 (MMP-2)、及びMMP-2の阻害物質であるtissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1), TIMP-2の変動に及ぼすアセトアルデヒド(AcCHO)の影響を遺伝子発現レベルの面から検討した。 方法は5-6代10%FCS添加DMEM培養液で継代培養したヒト培養伊東細胞を用い、培養系伊東細胞がsemiconfluent stageに達した時期に血清freeの条件に24時間放置後、終濃度0, 20,および40μmol/LにAcCHOを添加培養し、RNAを抽出し、既に報告されているヒトMMP-2, TIMP-1, TIMP-2遺伝子配列より夫々プライマーを設定し、定量的RT-PCR法にてmRNA発現半定量を行った。定量域を決めるためのPCR条件の設定は、1μgのtotal RNAから得られた50μlのcDNA溶液の1μlを用いて25cycle行うこととし、対照にはβactinとの相対的mRNA発現量を測定した。 その結果AcCHO添加によりMMP-2遺伝子の発現量は低下し、TIMP-1では増加が見られた。以上の結果はAcCHOはIV型コラゲン分解に対し抑制的作用を発揮する可能性が示唆された。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Nakabayashi H, Takamatsu S他: "Collgen content of liver biopsy specimen in patients with chronic hepatitis" Int Hepatol Commun. 4・6. 311-315 (1996)
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[Publications] Nakano H. Okamoto Y.他: "Application of neural network to the interpretation of laboratory data for the diagnosis of two forms of chronic active hepatitis" Int Hepatol Commun. 5・3. 160-165 (1996)