1998 Fiscal Year Annual Research Report
着床現象におけるβ_1インテグリンファミリーの生理的役割
Project/Area Number |
08671925
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Research Institution | DEPARTMENT OF OBSTETRICS AND GYNECOLOGY,KYORIN UNIVERSITY SCHOOL OF MEDICINE |
Principal Investigator |
塩川 滋達 杏林大学, 医学部, 助手 (50241005)
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Keywords | β_1 integrins / Human decidual cell / Implantation / RGD Cross-linking region |
Research Abstract |
インテグリンβ_1サブユニットのアミノ酸配列における140-164は、フィブロネクチン(FN)のRGDのbinding-siteである。インテグリンβ_1[140-164]のアミノ酸を合成し、ヒト妊娠初期脱落膜細胞表面のβ_1インテグリンのbinding-siteの生理的意義を検討した。1)細胞培養法:SatyaswaroopおよびBravermanらの方法に従ってインフォームドコンセント後、手術時に採取した組織より妊娠初期脱落膜間質の培養細胞を作成した。2)FNおよび各合成ペプチドでcoatしたdishを作製、脱落膜培養細胞を分注し、30分間37℃95%air-5%CO_2で培養した後にEDTAを用いて剥離し、脱落膜培養細胞の接着率(%)を求めた結果DDの添加は、脱落膜培養細胞のFNへの接着を有意に抑制した(Cont:88,DD10μM:12,AA10μM:90)。3)Blastocyst attachment spreading assay(BASA):7週令のCD-1雌マウスをPMSG-hCGにて過排卵誘起し、同系雄マウスと交配しhCG投与96h後に子宮内初期胚(桑実胚および初期胞胚)を回収し脱落膜間質細胞と共培養する。control群にはAAペプチドを、実験群にDDペプチドを加え、trophoblastのoutgrowthした面積をオリンパスSP500にてコンピュータ画像解析し比較検討した。その結果脱落膜培養細胞へのDD、AAの添加はマウス初期胚のhatching、attachmentに影響を与えなかった。AAの添加はマウスのtrophoblasのoutgrowthに影響を与えなかった。DDの添加はマウスのtrophoblastのoutgrowthした面積(μm^2)を用量反応性に抑制した(非添加:126、AA10μM:120,DD10μM:54,DD1μM:68,DD0.1μM81)。以上より、ヒト妊娠初期脱落膜細胞は、細胞表面上のインテグリンβ_1サブユニットの140-164アミノ酸を介してFNのRGDを認識し、着床現象に関与しているものと考えられた。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] S.Shiokawa et al: "Functional role of Arg-Gly-Asp(RGD)-blncling sites on β_1integrin in embryo Implantation" Biol Reprod. (In press). (1999)
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[Publications] S.Shiokawa et al: "Functional role of Cocal adhesion kinase in the process of implantation" Mol Hum Reprod. 4. 907-914 (1998)